[发明专利]一种分离骨髓单个核细胞的方法

权利要求书

1.一种分离骨髓单个核细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：取骨髓液与明胶混匀，自然沉降一段时间；

步骤2：取步骤1中得到的明胶悬液层进行离心分离操作，弃去上清液，加入PRMI1640培养液重悬细胞；

步骤3：取步骤2中得到的重悬细胞液与低糖DMEM培养液混匀，缓慢加入到Ficoll溶液表面，室温下进行离心分离操作；

步骤4：离心完毕后，小心吸取步骤3中得到的混悬液中层云雾状细胞层，用PBS洗涤后进行离心分离操作，以含10％胎牛血清的低糖DMEM培养液配成一定浓度的悬液，即得。

2.如权利要求1所述的一种分离骨髓单个核细胞的方法，其特征在于，所述步骤1中的明胶的质量百分比为3％，骨髓液与明胶的体积比为1∶1，沉降时间为1h。

3.如权利要求1所述的一种分离骨髓单个核细胞的方法，其特征在于，所述步骤2中的离心分离操作参数为取350g明胶悬液层离心分离8min。

4.如权利要求1所述的一种分离骨髓单个核细胞的方法，其特征在于，所述步骤3中的重悬细胞液与低糖DMEM培养液及Ficoll溶液的体积比为1∶1∶2，离心分离操作参数为取800g上述混悬液离心分离20min。

5.如权利要求1所述的一种分离骨髓单个核细胞的方法，其特征在于，所述步骤4中的用PBS洗涤次数为2～3次，离心分离操作参数为取上述用PBS洗涤后的混悬液中层云雾状细胞层600g离心分离5min，配制悬液浓度为1×10⁶个/ml。