[发明专利]一种玛咖多倍体植株的培育方法

权利要求书

1.一种玛咖多倍体植株的培育方法，其特征在于，所述培育方法包括以下步骤：

（1）以B₅为基本培养基，附加蔗糖20000mg/L和琼脂粉4800mg/L，调整pH值为5.4-5.8，制得培养基A；用细纱布将玛咖种子按100粒/包，包好放到流水下冲洗2 h后，置于超净工作台上，用体积比75％的酒精浸泡60 s，再用质量比0.1％ HgCl₂灭菌8 min，最后用无菌水冲洗10次，每次不低于2 min，之后放在无菌滤纸上，打开细纱布吸干表面水分，得到消毒灭菌处理的种子，将所述消毒灭菌后的玛咖种子接种于所述培养基A中，在光照度1500-2000 lx，光照时间10 h/d，温度控制在20±1℃的条件下，进行种子萌发；

（2）以B₅为基本培养基，附加萘乙酸NAA 1.5-2.0 mg/L、玉米素ZT 0.1-1.0 mg/L、秋水仙素0.5-2.0 mg/L、蔗糖20000mg/L和琼脂粉4800mg/L，调整pH值为5.4-5.8，制得愈伤组织诱导培养基B；所述步骤（1），种子在所述培养基A中培养5-7d后，幼苗子叶完全展开，将下胚轴切为0.5-1.0 cm大小，转接至所述愈伤组织诱导培养基B中，在光照度1500-2000 lx，光照时间10 h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养5d后有愈伤组织出现，20d后愈伤组织生长迅速，质地紧密，表被白色绒毛；

（3）以B₅为基本培养基，附加6-苄胺基嘌呤6-BA 1.0-2.0 mg/L、萘乙酸NAA 1.5-2.0 mg/L、玉米素ZT 0.1-1.0 mg/L、秋水仙素0.05-0.5 mg/L、蔗糖20000 mg/L和琼脂粉4800 mg/L，调整pH值为5.4-5.8，制得丛生芽诱导与增殖培养基C；将所述步骤（2）中培养的愈伤组织切割为0.5-1.0 cm²大小，转接至所述丛生芽诱导与增殖培养基C中，在光照度1500-2000 lx，光照时间10 h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养20d，待丛生芽生长旺盛时，将丛生芽切割为3-5芽一丛，转接至另一个新鲜的所述丛生芽诱导与增殖培养基C中，如此反复继代增殖3-4代，即获得玛咖多倍体芽；

（4）以1/2B₅为基本培养基，附加萘乙酸NAA 0.1-0.5 mg/L、吲哚丁酸IBA 0.1-0.5 mg/L、活性炭AC 0.5-1.5 mg/L、蔗糖10000 mg/L和琼脂粉4800mg/L，调整pH值为5.4-5.8，制得生根培养基D；切取所述步骤（3）所得的多倍体芽中高3-4 cm、生长健壮的单芽接种于所述生根培养基D中，在光照度1500-2000 lx，光照时间10 h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养25 d后获得玛咖多倍体试管生根苗；

（5）取所述步骤（4）所得的高6-8cm的生根苗置于室温下炼苗3 d后，打开瓶盖从所述生根培养基D中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1-0.2%的多菌灵溶液中消毒2-3 min后，移栽至装有经消毒的腐殖质的漂浮盘中，保持18-25℃温度漂浮培养60 d后，即得玛咖多倍体移栽苗。