[发明专利]一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种鸡白痢染色凝集抗原，其特征在于：由鸡白痢沙门氏菌SP7220、SP7701、SP8441和SP9905制成，所述的鸡白痢沙门氏菌SP7220、SP7701、SP8441和SP9905均已于2014年10月15日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号分别为：CCTCC NO.M 2014476、CCTCC NO.M2014475、CCTCC NO.M 2014477、CCTCC NO.M 2014478。

2.根据权利要求1所述的一种鸡白痢染色凝集抗原，其特征在于：所述的鸡白痢染色凝集抗原含有的细菌浓度为每毫升1.0×1010CFU，其中含有鸡白痢沙门氏菌SP7220、SP7701、SP8441和SP9905的细菌数量比例分别为40％、25％、20％和15％。

3.根据权利要求1或2所述的一种鸡白痢染色凝集抗原，其特征在于，通过以下方法制备：

1)种子菌液的制备：将鸡白痢沙门氏菌SP7220、SP7701、SP8441和SP9905菌种分别经液体培养基复苏繁殖后，接种固体平板培养基，37℃培养22h，挑选典型菌落接种固体斜面培养基，37℃培养24h后用液体培养基洗下菌苔，再接种固体扁瓶培养基，37℃培养24h后用液体培养基洗下菌苔检验合格后作为种子菌液；所述液体培养基组成为：牛肉汤500ml、猪胃消化液500ml、甘油12.0ml、硫代硫酸钠5.0g、柠檬酸钠3.0g、硫酸锰0.5g、硫酸镁0.4g、硫酸亚铁0.1g、磷酸氢二钾3.5g、海藻糖12.0g、水解乳蛋白5.0g；所述固体平板培养基和固体斜面培养基通过液体培养基中加入1.5％的纯化琼脂粉制成；

2)细菌培养：将种子菌液按培养基体积的4.0％接种固体扁瓶培养基，经37℃培养48h后取出，用含有0.3％福尔马林生理盐水洗下菌苔，经灭菌纱布过滤后收集菌液，置4℃过夜灭活；

3)抗原制备：将灭活菌液经4000r/min离心15min去上清，用0.2％福尔马林生理盐水重新悬浮菌泥，将4个抗原生产菌种按比浊度调整菌液浓度至每毫升1.2×1010CFU的菌液浓度后充分混匀，用2.0％结晶紫溶液按体积比1：10加入上述菌液中，间隔2h后再加一次，加入后充分混匀，于37℃放置24h充分染色后，无菌分装制成鸡白痢染色凝集抗原；所述鸡白痢染色凝集抗原含有的细菌浓度为每毫升1.0×1010CFU，其中含有鸡白痢沙门氏菌SP7220、SP7701、SP8441和SP9905的细菌数量比例分别为40％、25％、20％和15％。