[发明专利]一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法和应用，属于兽医诊断技术领域。该抗原是将鸡白痢沙门氏菌菌种SP7220、SP7701、SP8441和SP9905分别复苏传代后制成种子菌液，再将种子菌液接种固体培养基增殖，经福尔马林灭活后，通过比浊法调整菌液浓度，最后加入结晶紫溶液染色后充分混匀分装即制成鸡白痢凝集抗原。本发明工艺方法简单合理、科学、生产稳定，成本低廉，选用的鸡白痢染色凝集抗原生产菌种抗原性好、变异率低，制成的鸡白痢染色凝集抗原产品具有敏感性高、特异性强、诊断快速、凝集图像清晰的优点，是一种较为理想的检测鸡白痢的染色凝集抗原。

技术领域

本发明属于兽医诊断技术领域，尤其涉及一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法和应用。

背景技术

鸡白痢是严重危害养鸡业健康发展的重要疾病之一，可造成雏鸡较高的发病死亡率，以及成年鸡生产性能降低。经蛋传播是该病的主要途径，因而对种鸡及其所产的蛋有计划地进行检测，淘汰阳性鸡，培育无白痢种鸡群，切断垂直传播途径，是控制该病的关键所在。国内外对种鸡鸡白痢的净化方法主要采取全血或血清玻板凝集试验，发现阳性鸡及时淘汰，直至全群的阳性率不超过0.1％为止。虽然我国已有用于检测鸡白痢的平板染色抗原产品如“鸡白痢、鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原”，但该抗原在实际应用中存在敏感度低、诊断速度慢、凝集图像不够清晰等缺陷，导致检测后的种鸡群不能达到彻底净化的目标，给养殖者造成了严重的经济损失。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法，该抗原由鸡白痢沙门氏菌SP7220、SP7701、SP8441和SP9905制成，用于在鸡白痢检测试剂中的用途。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种鸡白痢染色凝集抗原，该抗原由鸡白痢沙门氏菌SP7220、SP7701、SP8441和SP9905制成。鸡白痢沙门氏菌SP7220、SP7701、SP8441和SP9905是从历年来收集、保存的500余株自然病例所分离的鸡白痢沙门氏菌菌种中，经多年反复筛选验证后获得的4株抗原性好、变异率低的鸡白痢沙门氏菌菌种。

鸡白痢沙门氏菌SP7220(Salmonella pullorum SP7220)、SP7701(Salmonellapullorum SP7701)、SP8441(Salmonella pullorum SP8441)、SP9905(Salmonellapullorum SP9905)已于2014年10月15日在中国典型培养物保藏中心(中国.武汉.武汉大学)保藏，名称及鉴别特征：鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)，株号：SP7220，保藏编号：CCTCC NO.M 2014476；鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)，株号：SP7701，保藏编号：CCTCC NO.M 2014475；鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)，株号：SP8441，保藏编号：CCTCC NO.M 2014477；鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)，株号：SP9905，保藏编号：CCTCC NO.M 2014478。

本发明提供了鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，包括如下具体步骤：

1)种子菌液的制备：将鸡白痢沙门氏菌SP7220、SP7701、SP8441和SP9905菌种分别经液体培养基复苏繁殖后，接种固体平板培养基，37℃培养22h，挑选典型菌落接种固体斜面培养基，37℃培养24h后用液体培养基洗下菌苔，再接种固体扁瓶培养基，37℃培养24h后用液体培养基洗下菌苔检验合格后作为种子菌液；

2)细菌培养：将种子菌液按培养基体积的4.0％接种固体扁瓶培养基，经37℃培养48h后取出，用含有0.3％福尔马林生理盐水洗下菌苔，经灭菌纱布过滤后收集菌液，置4℃过夜灭活；