[发明专利]一种高效发酵生产L-丙氨酸的大肠杆菌

权利要求书

1.一种大肠杆菌生产L-丙氨酸的方法，其特征在于，所述方法为分两阶段控制发酵温度，在第一阶段，控制较低培养温度，在28～35℃好氧条件下培养菌体，使菌体快速生长而不合成L-丙氨酸，然后在第二阶段，提高培养温度，于40～45℃好氧培养菌体片刻，然后进入限氧发酵产L-丙氨酸的阶段；

所述大肠杆菌，已于2015年3月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，保藏编号为CGMCCNo.10628；

将活化后的大肠杆菌接种于装液量60％的发酵罐中，进行两阶段发酵，(1)好氧阶段培养：初始空气通量为3L/min，搅拌桨转速为200r/min，此时的溶解氧浓度设定为100％，菌体生长过程中调节空气通量直至7L/min，同时将搅拌转速与DO值关联来控制溶解氧浓度始终大于30％；控制pH值为7.0，发酵温度28～35℃；(2)限氧阶段培养：当至菌体生长到对数中后期，升高温度至40～45℃继续好氧培养45min；然后再进入限氧发酵产酸阶段：空气通量调为零，搅拌桨转速控制为100r/min，控制pH值为7.0，发酵温度为40～45℃，并补加三次浓度为600g/L的葡萄糖，每次补加200mL，以维持发酵过程中发酵液残糖浓度高于10g/L，当所有补加的葡萄糖消耗尽后即结束发酵；

每升发酵培养基含：30g葡萄糖，15.11g Na₂HPO₄·12H₂O，3g KH₂PO₄，1g NH₄Cl，0.5gNaCl，13.2g(NH₄)₂SO₄，并补加1‰1mol/L MgSO₄和1‰的微量元素母液；每升微量元素含：2.4g FeCl₃·6H₂O，0.3g CoCl₂ ·6H₂O，0.15g CuCl₂·2H₂O，0.3g ZnCl₂，0.3g Na₂MO₄·2H₂O，0.075g H₃BO₃，0.495g MnCl₂·4H₂O。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以葡萄糖为唯一碳源。