[发明专利]一种提高SSR分子标记扩增和检测效率的方法在审
| 申请号： | 201510167089.5 | 申请日： | 2015-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN104762393A | 公开（公告）日： | 2015-07-08 |
| 发明（设计）人： | 翟立红;腾峰;李知洪;张祖新 | 申请（专利权）人： | 湖北文理学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京智为时代知识产权代理事务所(普通合伙) 11498 | 代理人： | 王加岭;杨静 |
| 地址： | 441053 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 ssr 分子 标记 扩增 检测 效率 方法 | ||
1.一种提高SSR分子标记扩增和检测效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)基因组DNA的提取；
(2)SSR分子标记的PCR扩增；所述PCR扩增包括2个不同的循环程序；
(3)聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳检测采用六次点样法；所述六次点样法为同一个加样孔中分时段先后6次加入不同的PCR产物；
(4)银染显色。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增方法为：94℃3min；94℃30s，53-62℃30s，72℃30s，15个循环；94℃20s，53-62℃20s，72℃30s，20个循环；72℃5min。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增方法为：94℃3min；94℃30s，56-60℃30s，72℃30s，15个循环；94℃20s，56-60℃20s，72℃30s，20个循环；72℃5min。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增方法为：94℃3min；94℃30s，58℃30s，72℃30s，15个循环；94℃20s，58℃20s，72℃30s，20个循环；72℃5min。
5.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，在点样之前进行预电泳，使电泳缓冲液的温度达到50℃。
6.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)中电泳条件为2000V，100mA，80W恒功率电泳。
7.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述六次点样法为在预电泳结束后，向点样孔中加入扩增产物，开始第一次点样，电泳5-20min之后，进行第二次点样，电泳时间与第一次时间相同，之后再进行第三次电泳，电泳时间比第二次缩短1min，以此类推，至第五次点样后电泳时间比第4次的电泳时间缩短1min；第六次点样之后，电泳20-40min，结束电泳。
8.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述六次点样法为在预电泳结束后，向点样孔中第一次点样加入扩增产物，电泳8min后进行第二次点样，电泳8min后进行第三次点样，电泳7min后进行第四次点样，电泳6min后进行第五次点样，电泳5min后进行第六次点样，电泳30min，结束电泳。
9.权利要求1-8任一所述的方法在植物遗传系谱分析中的应用。
10.权利要求1-8任一所述的方法在高通量植物样本基因型检测中的应用。
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