[发明专利]一种用于干扰罗氏沼虾雄性生殖的核酸分子及其制备方法

权利要求书

1.核酸分子在制备干扰罗氏沼虾雄性生殖发育的双链RNA中的应用，其中核酸分子的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的核酸分子的核苷酸序列为SEQ ID NO:3。

3.一种将核苷酸分子制成双链RNA的方法，其特征在于，所述的核苷酸分子的序列为SEQ ID NO:1；

所述的方法包括有如下的步骤：

1)目的核酸片段的扩增：

以罗氏沼虾雄性生殖系统组织的cDNA为模板，进行PCR扩增，得到目的基因的核苷酸片段，其中扩增所用的引物序列如下：

正向引物序列为：5′-GCTCTAGAATAATGGCTCCCTTCTTCAA-3′，

反向引物序列为5′-CGGGATCCGCTCAATCATAAAAACGTCC-3′；

2)连接转化

利用限制性核酸内切酶，对目的核苷酸片段和双链表达质粒分别进行双酶切，将酶切后的目的片段和质粒进行连接，制备获得含有目的核苷酸片段的重组质粒，将该重组质粒转入到大肠杆菌的感受态细胞E.coli DH5α中，鉴定并挑选出含有正确插入序列的单菌落；

3)双链RNA的诱导表达

从大肠杆菌中抽提出含有目的插入序列的载体，并将其转入到表达型大肠杆菌的菌株E.coli HT115中，摇菌，进行扩大培养，添加适量的异丙基硫代半乳糖苷诱导双链表达；利用离心的方式收集菌体，根据双链RNA的纯化流程，将菌种中的双链RNA抽提纯化，琼脂糖电泳，测定双链RNA浓度，低温保存。