[发明专利]一种用于干扰罗氏沼虾雄性生殖的核酸分子及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于基因缺失失活技术领域，具体涉及一种用于干扰罗氏沼虾雄性生殖的核糖核酸分子，可用于罗氏沼虾雄性生殖相关的RNA干扰研究。

背景技术

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术作为一种基因功能研究的重要手段，已被广泛用于探索虾蟹动物的基因功能领域。RNA干扰是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能领域。

目前，RNA干扰技术主要是利用小干扰RNA(siRNA)来实现基因沉默，其制备方法主要有化学合成，体外转录和体内表达三种，各有利弊。化学合成方法能制备高质量的RNA干扰样品，但价格高，定制周期长；体外转录方法合成，成本相对较低，但实验的规模和量受到限制，不适用于样品需求量大的长期研究；体内表达主要指采用siRNA表达载体和基于PCR的表达框架，可以进行较长期研究，但只适用于细胞水平。

虾蟹动物作为一种重要的经济甲壳动物，其功能基因的发掘和应用研究进展较慢，主要原因之一是缺乏可用于长期动物实验研究所需的、具有高效基因沉默效果的RNA干扰样品。目前，常用的小干扰RNA在动物实验时难以维持长效的干扰效率，而且动物实验所需RNA用量大，合成成本过高。因此，在探索虾蟹动物基因功能领域中，快速而高效地制备大量的双链RNA样品，是开展长期动物实验研究的重要前提和基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于干扰罗氏沼虾雄性生殖的核糖核酸分子及其制备方法，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种用于干扰罗氏沼虾雄性生殖的双链核糖核酸分子，包含有：

1)核苷酸序列为SEQ ID NO:1的核酸分子

Tgtttgctggttttgatgaaaaaaggaatcgtcattcttgagatctggagagcgagattagcaacagaggtcactgcgaataatggctcccttcttcaagttgatctccgtcatggtgatggtcgccatgggattcatcctggtctctgaagctgcaagtgatttacaagatgctgcaatgcacgattatccaactgtgcttgaaataatcggaagtccacgaatgaagaggtctccccacaaagcagagagcggtttctacggcagtaacagggggatggaagcagacttctttggcgactctggaacctattccacaggatacggtttggggggtctgtcaagattaacaggcaaattcagtggcgaaggggaattcgctggcggagctcattcaggacgtttttatgattgagctgctgtgcttcagtaatggcgaccacagggtccaatcaggagaatgacccagattcacagtttggacatgatagcggataagaaatatggtactgatttgttaaaaagcatagaatgagctgaattcaatttaaagaaaggattttactacttttactaataagtaaagcgcctgtttctcgacaataaacatcatcacgataggagttaaagaaacatttatgtaaattaggaaataaatcaattcacttaataaaaaaaaaaaa；

2)与1)中的核酸分子具有85％以上同源性，且具有1)中核酸分子作用的核酸。

上述2)中的同源性，优选为90％以上；

上述核苷酸分子编码的蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO2；

MAPFFKLISVMVMVAMGFILVSEAASDLQDAAMHDYPTVLEIIGSPRMKRSPHKAESGFYGSNRGMEADFFGDSGTYSTGYGLGGLSRLTGKFSGEGEFAGGAHSGRFYD.

为了提高RNAi的效率，申请人对序列为SEQ ID NO:1的核酸分子进行了优化选择，在不改变编码蛋白序列的情况下，主要选取目的基因开放阅读框区域，包含338个核苷酸组成的基因片段序列，改造后的核酸分子的序列为SEQ ID NO:3；