[发明专利]小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法及其专用引物组与试剂盒

权利要求书

1.检测小反刍兽疫病毒的环介导等温扩增引物组，为引物组A或引物组B；所述引物组A由引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6组成；所述引物组B由所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4组成；

所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分别为序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5和序列6。

2.检测小反刍兽疫病毒的环介导等温扩增试剂，包括链置换型DNA聚合酶、逆转录酶、甜菜碱、dNTPs、Mg²⁺和权利要求1或2所述的引物组。

3.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于：所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5、所述引物6、所述dNTPs、所述Mg²⁺、所述链置换型DNA聚合酶、所述逆转录酶和所述甜菜碱在所述扩增试剂中的配比为40pmol：40pmol：5pmol：5pmol：20pmol：20pmol：35nmol：200nmol：8U：8U：20μmol；或

所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述dNTPs、所述Mg²⁺、所述链置换型DNA聚合酶、所述逆转录酶和所述甜菜碱在所述扩增试剂中的配比为40pmol：40pmol：5pmol：5pmol：35nmol：200nmol：8U：8U：20μmol。

4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于：所述链置换型DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶大片段；或

所述逆转录酶为MLV逆转录酶。

5.检测小反刍兽疫病毒的环介导等温扩增试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求1所述的引物组，或权利要求2-4中任一所述的试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括荧光显色剂。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述荧光显色剂为含有钙黄绿素和MnCl₂的水溶液；

所述荧光显色剂中，所述钙黄绿素和所述MnCl₂的配比为0.5mmol：10mmol。

8.根据权利要求5-7中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有记载有检测或辅助检测待测样品中是否含有小反刍兽疫病毒的环介导等温扩增方法的可读性载体；

所述检测或辅助检测待测样品中是否含有小反刍兽疫病毒的环介导等温扩增方法，包括如下(a)和(b)的步骤：

(a)以从待测样品中提取的基因组DNA为模板，用权利要求1所述引物组进行环介导等温扩增；

(b)根据步骤(a)的扩增结果，按照如下(b1)或(b2)的方法确定所述待测样品中是否含有小反刍兽疫病毒：

(b1)反应结束后，若所述待测样品反应液出现白色沉淀物，则所述待测样品中含有或候选含有小反刍兽疫病毒；反之，则所述待测样品不含或候选不含有小反刍兽疫病毒；

(b2)反应结束后，向所述待测样品的反应液中加入权利要求7中所述的荧光显色剂，然后观察所述反应液的颜色变化；

若所述待测样品反应液为绿色，则所述待测样品中含有或候选含有小反刍兽疫病毒；若所述待测样品反应液为橙色，则所述待测样品中不含有或候选不含有小反刍兽疫病毒。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述录环介导等温扩增反应为60-65℃条件下的恒温反应50min。

10.如下a)或b)的应用：

a)权利要求1所述的引物组在制备权利要求2-4中任一所述试剂或权利要求5-9中任一所述试剂盒中的应用；

b)权利要求1所述的引物组或权利要求2-4中任一所述的试剂或权利要求5-9中任一所述试剂盒在制备检测或辅助检测待测样品中是否含有小反刍兽疫病毒的产品中的应用。