[发明专利]小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法及其专用引物组与试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域中病毒的分子生物学检测方法，特别是涉及小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法及其专用引物与试剂盒。

背景技术

小反刍兽瘟病毒在分类上属副粘病毒科，麻疹病毒属的一员。本病毒只有一个抗原型，其抗原性与牛瘟病毒接近。经交叉血清中和试验和补体结合试验指出，补体结合抗体和中和抗体对小反当兽病毒和牛瘟病毒都发生阳性反应，但对异源病毒的效价不如对同源病毒的效价高。有人用琼脂扩散试验观察到同源和异源系统都有两条沉淀线，证明有共同抗原，但因在沉淀线接合处出现交叉，所以认为两者的抗原不是完全相同的。用猪麻疹疫苗免疫山羊，不能抵抗小反当兽瘟病毒的攻击，而用犬瘟热疫苗免疫可以抵抗小反当兽瘟病毒的攻击，但不能完全保护。病毒粒子呈近球形，大小为120-300纳米，有囊膜，囊膜上有纤突，为单股负链RNA病毒。用猴、牛、绵羊、山羊、马、猪、犬、猫、鸡、豚鼠等动物的红细胞进行血凝试验均未证实有血凝活性。病毒对乙醚敏感，在pH3.0条件下3小时灭活，嗅脱氧尿昔对病毒无作用。病毒悬液在37℃的半衰期约为2小时，在50℃半小时即死亡。实验感染山羊尸体，在4℃保存8天后，从淋巴结内可见到本病毒，但滴度明显下降。对外界环境的抵抗力较弱，一般消毒药均能杀死病毒。为此，开展小反刍兽疫病毒的实验室诊断研究具有重要意义。目前用于小反刍兽疫病毒诊断的实验室方法很多，如病毒的分离鉴定、免疫荧光抗体技术、ABC-ELISA试验和琼脂扩散试验等，其中琼脂扩散试验简便、快速，常用于小反刍兽疫病毒病毒或血清的检查，但是其敏感性较低，很难在临床上推广应用。为此，急需建立一种敏感、准确、快速、简便的小反刍兽疫病毒实验室诊断方法。虽然基于PCR技术的检测方法也已建立，但PCR需要昂贵的仪器，而且操作繁琐。

环介导的等温核酸扩增技术(LAMP)是由T.Notomi(Notomi T,Okayama H,MasubuchiH,et al.Loop-mediated isothermal amplification of DNA.Nucleic Acids Res2000；28(12):63.)发明的一种新型核酸扩增技术，该技术依赖4条特异设计的引物和一种具有链置换特性的DNA聚合酶，在等温条件下可以高效、快速、高特异地扩增靶序列。近年来，国外已将该技术广泛应用于病原体检测。Masaki Imai等人(Imai M，Ninomiya A，Minekawa H，et al.Rapid diagnosis of H5N1 avian influenza virus infection by newly developed influenza H5 hemagglutinin gene-specific loop-mediated isothermal amplification method.J Virol Methods.2007；141(2):173-80.)利用LAMP建立了禽流感病毒的实验室确诊体系；Nobuyuki Hayashi等人(Hayashi N,Arai R,Tada S,Taguchi H,Ogawa Y.Detection and identification of Brettanomyces/Dekkera sp.yeasts with a loop-mediated isothermal amplification method.Food Microbiol.2007；24(7-8):778-85.)针对四种香酒酵母的ITS序列设计了LAMP特异性引物，建立了高效的LAMP检测体系。LAMP还可以检测其它与人类相关的病毒，如病毒性出血性败血病(VHS)、巨细胞病毒(CMV)、埃博拉病毒(EBOV)、慢性伯基特淋巴瘤病毒(EBV)、虹彩病毒、人类疮疹病毒8型、造血组织坏死病毒(IHHNV)、番茄斑萎病毒和番茄黄化曲叶病毒等。但是迄今为止，市场上还未见用于检测小反刍兽疫病毒的LAMP专用引物与试剂盒问世。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测小反刍兽疫病毒的环介导等温扩增引物组。

本发明所提供的检测小反刍兽疫病毒的环介导等温扩增引物组，具体可为引物组A或引物组B。

所述引物组A由引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6组成；所述引物组B由所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4组成；