[发明专利]一种抗氧化的多糖-多肽纳米颗粒的制备方法

权利要求书

1.一种抗氧化的多糖-多肽纳米颗粒的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：

(1)、将壳聚糖(0.303g，1.85mmol)和羟基苯并三氮唑(0.282g，1.85mmol)共溶于30mL去离子水中，搅拌过夜，直至溶液澄清透明；

(2)、将没食子酸(0.311g，1.85mmol)逐滴加入壳聚糖溶液中，然后逐滴加入2mL的1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基亚胺)盐酸盐(EDC HCl)的乙醇溶液(0.355g，1.85mmol)；

(3)、调节壳聚糖中氨基葡萄糖单元与没食子酸的比例(1∶0.1，1∶1，1∶3和1∶5)，以合成具有不同没食子酸接枝率的没食子酸接枝壳聚糖共聚物；

(4)、将壳聚糖与没食子酸的混合物在室温(25℃)、避光条件下反应24小时；

(5)、反应结束后，将反应的混合物倒入透析袋(MWCO 3,500 Da)中，透析6天，每天换四次水；

(6)、透析结束后，将合成的没食子酸接枝壳聚糖共聚物进行冷冻干燥，得到干燥的样品；

(7)、将步骤(6)中制备的没食子酸接枝壳聚糖共聚物溶于1％的醋酸溶液，直至完全溶解，调节pH到6.2；

(8)、将酪蛋白磷酸肽溶于去离子水中，调节溶液pH为6.2；

(9)、搅拌条件下，将步骤(7)中的没食子酸接枝壳聚糖共聚物溶液逐滴加入步骤(8)中的酪蛋白磷酸肽溶液中，直至壳聚糖与酪蛋白磷酸肽质量比为1∶1，溶液呈现乳光，制备纳米颗粒。

(10)、分别应用DPPH自由基和亚油酸自由基法测定制备的没食子酸接枝壳聚糖-酪蛋白磷酸肽纳米颗粒的抗氧化活性。

2.没食子酸接枝壳聚糖-酪蛋白磷酸肽纳米颗粒。由Folin-Ciocalteu反应结果计算得出，在氨基葡萄糖与没食子酸比例为1∶0.1，1∶1，1∶3和1∶5的条件下，没食子酸接枝壳聚糖共聚物中没食子酸的接枝率分别是26.5±1.0，113.7±1.1，126.0±1.1和122.6±2.2mg/g。没食子酸接枝壳聚糖-酪蛋白磷酸肽纳米颗粒特征是：粒径300nm，表面Zeta电位30mV，球形规则、分布均匀。没食子酸接枝壳聚糖-酪蛋白磷酸肽纳米颗粒对DPPH自由基和亚油酸自由基的清除能力随没食子酸接枝率的增加而提高，同时，随着纳米颗粒浓度的提高而增强。接枝率为126.0±1.1mg/g的没食子酸接枝壳聚糖-酪蛋白磷酸肽纳米颗粒在1.0mg/mL浓度下对DPPH自由基和亚油酸自由基的清除能力分别达到85％和90％。