[发明专利]一种牛奶蛋白的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于畜产品质量检测技术领域，具体涉及一种牛奶蛋白的检测方法。

背景技术

蛋白质是牛奶的主要成分之一，也是牛奶检测中最重要的质量指标之一。目前，国内外关于牛奶蛋白检测方法的报道很多，主要有凯氏定氮法、双缩脲法、Folin酚法、考马斯亮蓝法、毛细管电泳法、ELISA法、高效液相色谱法、近红外光谱法等方法^[1-9]。其中，凯氏定氮法是国家标准和国际标准中首推的蛋白质检测方法，但是该方法操作复杂，耗时长，并且需要浓酸浓碱，操作危险并且会产生有害气体。此外，凯氏定氮法无法区别无机氮和有机氮，一些不法分子利用这一缺陷往牛奶中添加铵盐类。其他一些方法虽然在某些方面具有明显优势，但也或多或少存在不足之处，如双缩脲法检测速度快，但是灵敏度较差；考马斯亮蓝法用于不同样品时容易出现偏差；毛细管法蛋白质容易黏附在毛细管上；HPLC法、近红外光谱法的仪器和耗材昂贵，并且需要专门的技术人员操作。

牛奶的蛋白质含量大约为3.0％左右，其乳清蛋白的含量为14％～24％，酪蛋白的含量为76％～86％，对同一品种奶牛来说，其组分含量变化相对较小。因此，牛奶当中酪蛋白含量的多与少，也代表牛奶中蛋白含量的多与少。近年来，关于酪蛋白的研究报道已经很多，在science direct上有89896篇关于casein的文献，在知网上也有13590篇关于酪蛋白的文献。这些文献主要涉及酪蛋白的分离、鉴定、组成、结构、功能、改性及检测等方面的研究，并且也有学者通过测定牛奶酪蛋白含量来鉴别牛奶掺假^[2,10,11]。但是，还未见有通过建立牛奶蛋白与酪蛋白沉淀质量之间相关关系的回归数学模型，然后利用回归数学模型来测定牛奶蛋白含量以及鉴别掺假的文献报道。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术存在的缺陷与不足，提供一种基于酪蛋白特性的牛奶蛋白的检测方法，本发明是根据酪蛋白沉淀质量与酪蛋白含量密切相关、酪蛋白含量又与牛奶蛋白含量密切相关，那么酪蛋白沉淀质量与牛奶蛋白含量也应该密切相关这一原理来测定牛奶蛋白。本发明优化了酪蛋白的沉淀条件，分析了牛奶蛋白与酪蛋白沉淀之间的相关关系、建立牛奶蛋白与酪蛋白沉淀的比值之间的回归数学模型，利用获得的回归模型计算牛奶蛋白含量等，本发明能准确检测牛奶蛋白含量，并能协助鉴别牛奶铵盐掺假，与传统方法相比，本发明的方法简单、快捷、经济、实用。

本发明通过以下技术方案实现：

一种牛奶蛋白的快速检测方法，包括以下步骤：

1)建立牛奶蛋白与酪蛋白沉淀的比值之间的回归数学模型；

2)向待测牛奶样品加冰乙酸溶液；

3)震荡并静置一段时间；

4)离心分离、倒掉上清液、甩干离心管并用滤纸擦拭离心管口；

5)准确称重、并计算酪蛋白沉淀的比值；

6)根据步骤1)的回归模型，计算牛奶样品中蛋白含量；

上述步骤2)中，取样牛奶体积与加冰乙酸溶液体积比为2：1，沉淀酪蛋白的冰乙酸浓度为0.3mol/L。

上述步骤3)中，加冰乙酸后，静置时间为9min。

上述步骤4)中，离心速度为12000r/min；离心时间为7min。

上述步骤1)中，所述的牛奶蛋白与酪蛋白沉淀的比值的回归数学模型的建立方法如下：

①以蒸馏水、纯牛奶、全脂奶粉为原料，分别配制蛋白含量为2.0g/100mL、2.2g/100mL、2.4g/100mL、2.6g/100mL、2.8g/100mL、3.0g/100mL、3.2g/100mL、3.4g/100mL、3.6g/100mL、3.8g/100mL、4.0g/100mL的液态奶样品，同时采用凯氏定氮法测定每个样品蛋白的真实含量，每个处理重复3次；

②按照上述步骤2)-4)，测定上述样品的酪蛋白沉淀的比值；

③采用Origin 8.0进行偏最小二乘法(PLS)数据分析，获得了牛奶蛋白与酪蛋白沉淀的比值的回归数学模型，其公式如下：

Y＝0.0645X+0.0581，R²＝9896，

式中：

Y：为酪蛋白沉淀的比值，即：酪蛋白沉淀质量：牛奶体积比，以g/ml计；X：为牛奶蛋白含量，以g/100mL计。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明检测效率高，从准备样品，到获得检测结果不超过30分钟，而传统测定方法大都在4、5个小时以上。