[发明专利]一种快速检测水貂病毒性肠炎病毒的双重PCR方法

权利要求书

1.一组用于快速检测水貂病毒性肠炎病毒的特异性引物，其特征在于选择在MEV的非结构蛋白NS1基因的保守区与结构蛋白VP2基因的保守区，分别设计一对针对NS1基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 1/SEQ.ID.NO 2和一对针对VP2基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 3/SEQ.ID.NO 4；

SEQ.ID.NO 1：5’-GGTTAGCTAAACATGGTTATG-3’；

SEQ.ID.NO 2：5’-GAGTCAGAGGAGTTAGAACG-3’；

SEQ.ID.NO 3：5’-CTTTGCCTCAATCTGAAGGAGT-3’；

SEQ.ID.NO 4：5’-GAATTGGATTCCAAGTATGAGAT-3’；

上述引物的使用方法如下：

A、以MEV DNA为模板进行PCR反应；反应体系为：17.3μl ddH₂O(Rnase free)，2.5μl Buffer，2μl dNTPs(10.0mM)，SEQ.ID.NO 1和SEQ.ID.NO 2各1.0μl，SEQ.ID.NO 3和SEQ.ID.NO 4各1.0μl，1μl DNA模板，0.2μl Taq酶；PCR反应条件为：95℃5min；94℃30s，53℃30s，72℃1min，32个循环；72℃10min；

B、对步骤A得到的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测：

如果同时扩增出了191bp和824bp的产物，则该样品为阳性，样品中含有MEV。