[发明专利]一种水溶性聚谷氨酸-顺铂复合物及其制备方法与应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种水溶性聚谷氨酸-顺铂复合物，并提供该复合物的制备方法、评价方法及其用于治疗肿瘤和癌症的应用，属于抗癌药物的制备领域。

背景技术：

顺铂[cis-dichlorodiammineplatinum(Ⅱ)，CDDP]为重金属络合物，临床上广泛应用于多种恶性肿瘤的治疗，抗癌谱广。顺铂抗肿瘤的作用原理是：顺铂水解后的Pt²⁺可与DNA双链中的碱基交联形成稳定的复合物，从而造成DNA的损伤，影响DNA的复制、转录，进一步抑制细胞DNA的合成，导致细胞死亡或凋亡。在实际应用中，顺铂给药后往往会产生严重的毒副作用，使患者难以接受，且在达到治疗效果的同时，引起严重的肝肾毒性、骨髓抑制、神经毒性及严重的胃肠道反应等，从而大大限制了顺铂在临床上的应用。目前国内外上市的顺铂制剂有顺铂注射液和注射用顺铂冻干粉两种。上述两种制剂均不能解决顺铂给药后清除较快，毒副作用大的缺陷。其他剂型的顺铂制剂正处于研发中，包括顺铂脂质体、顺铂聚合物胶束等，这些制剂可实现缓慢释放顺铂且被动靶向于肿瘤组织的目的，但存在稳定性差、易于泄露等缺陷从而限制了其应用。

目前，以生物发酵制得的天然的γ-PGA作为药物载体所表现出的优良的生物相容性与生物可降解性引起了广泛的关注，曾有研究报道以聚谷氨酸为载体，连接难溶性药物紫杉醇，所制成的紫杉醇药物传递系统不但提高了紫杉醇的溶解性，降低了其单独给药的毒性，而且在治疗效果和延长生存期上有较明显的优势，目前该制剂已进入Ⅲ期临床阶段。但γ-PGA本身作为线性单氨基酸高分子聚合物，活性基团位点排列过于紧密，且活性基团较为单一，可修饰的药物较少。单独以此作为药用载体存在载药量低、可载药物种类少、载体用量大、载药后溶解性差等缺点。因此，开发新型的改性γ-聚谷氨酸载体，以降低药物接入的空间位阻，增加活性基团种类与数目是目前有待进一步解决的重要问题之一。

本发明提供了一种增加γ-聚谷氨酸活性基团数目及种类，减小空间位阻的方法。鉴于顺铂有上述的缺陷，本发明可增加顺铂的溶解性，降低顺铂单独给药的毒性，是一种活性好，毒性低的新型顺铂复合物制剂。

中国专利申请CN102499986A公开了一种大分子-顺铂复合物的制备方法，其制备及评价方法包括：

(1)将γ-聚谷氨酸溶于适量纯水中，以EDC·HCl与NHSS为酯化反应催化剂，柠檬酸为小分子修饰剂进行反应，之后将反应液透析以除去小分子杂质，冷冻干燥制备γ-聚谷氨酸衍生物；

(2)用硝酸银将顺铂水化，之后与γ-聚谷氨酸衍生物进行配位结合，除去未完全反应的顺铂，从而冷冻干燥制备载药胶束。

(3)该载药胶束中顺铂的载药量为18％，有效结合率为65％。

上述制备方法及所得产物存在如下缺陷与问题：

(1)γ-聚谷氨酸衍生物的制备过程中所使用的催化剂之一为NHSS，其反应原理主要是使羧基与氨基进行酰胺化反应，而柠檬酸中的活性基团为羟基与羧基，催化剂选用NHSS时，γ-聚谷氨酸中小分子的接入率偏低。且NHSS价格较贵，生产成本较高，不适宜规模化生产。

(2)该载药胶束在制备的过程中应用硝酸银，生产成本较高，制备工艺过程中需要全程避光操作，对设备和环境要求较高。纯化后产物中有重金属银的残留，不同批次的载药胶束颜色不均一。

(3)该方法制备的γ-聚谷氨酸衍生物在接入顺铂时，由于小分子接入率低，顺铂的载入的空间位阻大，载药量低，载药后胶束体系难溶于水，通常需要升温以加速溶解。

(4)该方法在制备载药胶束时，将未反应的顺铂采用透析法去除，顺铂的接入率低，仅为65％。

(5)该方法在制备γ-聚谷氨酸衍生物与载药胶束过程中纯化步骤采用的是透析袋法，该方法不能完全去除未反应的小分子，且纯化时间较长，透析后溶液体积膨胀严重，较难冷冻干燥，难以规模化生产。

(6)该方法制备的载药胶束中顺铂均以配位键与载体相连，在体外细胞增殖实验中，对肿瘤细胞的抑制作用低于顺铂，顺铂的体内抗肿瘤活性优于所制备的载药胶束。

发明内容：

本发明是前述专利CN102499986A“一种大分子-顺铂复合物及其制备方法与应用”的继续，本发明包括但不局限于前述专利。

本发明的目的之一在于克服现有技术存在的上述缺点，提供一种小分子接枝率高的药物载体γ-聚谷氨酸衍生物。顺铂与其反应，通过化学结合与物理吸附的方式形成一种既包含结合顺铂又包含游离顺铂的聚谷氨酸-顺铂复合物，该复合物中顺铂总含量可控，提高了顺铂的利用率，降低了顺铂的毒副作用。