[发明专利]一种类芽孢杆菌细菌素制剂的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种类芽孢杆菌细菌素制剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于培养类芽孢杆菌的培养基中，震荡发酵培养获得发酵液，将所得发酵液离心取上清液；(2)将所得上清液与乙醇混合，乙醇与上清液混合的体积比为2:1～4:1，将所得混合液静置，静置的温度为2～10℃，静置的时间为12～36小时，将混合液离心收集沉淀物，除去溶剂即得。与传统细菌素相比，本发明制备的细菌素制剂性质更稳定，该细菌素制剂可以直接用于食品的生产，从而达到抑制腐败菌的增殖，延长食品货架期的目的，进而降低了食品防腐剂的应用成本。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种类芽孢杆菌细菌素制剂的制备方法及其应用。

背景技术

细菌素是某些细菌产生的具有抗菌活性的物质，主要成分为多肽、蛋白质或蛋白质复合物，最早由Jacob于1953年提出。近年来，广谱抗生素的普及甚至滥用所带来的负面效应日益突出，新型抗生素替代品的研究迫在眉睫。作为蛋白质类物质的细菌素，由于可被蛋白酶降解，其安全性很高，故受到越来越多的关注。尽管目前开发获得的细菌素(Nisin)已具备了极高的防腐与抑菌的应用价值，但受Nisin本身的特性(低pH条件下性质稳定，pH>7.0抑菌活性逐渐丧失)的影响，其应用的范围受到了极大的局限性，其次，制备细菌素的成本非常高、细菌素的来源相对有限，上述问题很大程度上限制了细菌素的开发和利用。

中国专利申请(CN 103740618A)公开了类芽孢杆菌属的一个新菌种，Paenibacillus damxungensis sp.nov.，并将其中的模式菌株BD3526于2013年10月14日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，该菌株的保藏编号为：CGMCC No.8333，该菌株的菌落非常粘稠，表明该菌株具有高产胞外多糖的生理特性，但尚未得到该菌株产出的抑菌性细菌素。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题就是针对现有细菌素制剂稳定性差，制备成本高，来源不足的现状，提供了一种类芽孢杆菌细菌素制剂的制备方法及其应用。

本发明人发现类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333菌株的发酵液上清，经乙醇沉淀处理后可获得具有强烈抑菌活性的细菌素制剂，从而完成了本发明。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一为：一种类芽孢杆菌细菌素制剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于培养类芽孢杆菌的培养基中，震荡发酵培养获得发酵液，将所得发酵液离心取上清液；

(2)将步骤(1)上清液与乙醇混合，乙醇与上清液混合的体积比为2:1～4:1，将所得混合液静置，静置的温度为2～10℃，静置的时间为12～36小时，将混合液离心收集沉淀物，除去溶剂即得。