[发明专利]一种Gilbert综合征基因突变检测试剂盒

权利要求书

1.一种Gilbert综合征基因突变检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒由丙烯酰胺修饰的PCR产物及其他成分固定于用丙烯基团修饰的玻片上而制成的DNA微阵列芯片，6种核苷酸探针部分组成， 其中，所述的丙烯酰胺修饰的PCR产物部分由4种引物PCR扩增获得，其中引物序列分别为:

SEQ ID NO.1: 5’-CAACTCATCCTTATTCTGAT -3’

SEQ ID NO.2: 5’-丙烯酰胺-CTCATGCCTCCTCTCTAACC-3’

SEQ ID NO.3: 5’-CCGAGCTACCTTTGTGGACT-3’

SEQ ID NO.4: 5’-丙烯酰胺-CACGATGCCCGAGACTAACTAA -3’

所述6种核苷酸探针部分序列分别为，

SEQ ID NO.5: 5’-TTCTGTTTGAAGA -3’

SEQ ID NO.6: 5’ -TTCTGTGTGAAGA -3’

SEQ ID NO.7: 5’ -GCCATATATATATATATAAG -3’

SEQ ID NO.8: 5’ -GCCATATATATATATATATAAG -3'

SEQ ID NO.9: 5’ - AGAG TCGGAGCTT -3’

SEQ ID NO.10:5’ -AGAGTCAGAGCTT - 3’；

所述的其他成分为30% 丙烯酰胺、50%丙三醇和10%过硫酸铵组成的混合溶液；

采用PCR产物及其他成分固定于用丙烯基团修饰的玻片上，制成的DNA微阵列芯片，用于与相应探针进行杂交反应；

所述的杂交反应中的杂交温度为30－40℃，杂交时间为1－3h。

2.根据权利要求1所述的Gilbert综合征基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒还包括阳性质控品，所述的阳性质控品为UGT1A1增强元件PBREM基因片段，UGT1A1启动子区片段和外显子1基因片段。

3.根据权利要求1所述的Gilbert综合征基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒用于基因突变所致的Gilbert 综合征的疾病筛选和临床辅助诊断。

4.一种如权利要求1所述的Gilbert综合征基因突变检测试剂盒的所用的DNA微阵列芯片制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）点样：将丙烯酰胺修饰的PCR产物和其他成分混合成预聚合物，然后将上述预聚合物溶液和空白对照点样于丙烯基团修饰的玻片上，其中，所述的其他成分为30% 丙烯酰胺、50%丙三醇和10%过硫酸铵组成的混合溶液，所述空白对照为水和30% 丙烯酰胺、50%丙三醇以及10%过硫酸铵混合成的预聚合物；

（2）固定：制备DNA微阵列芯片：点样完成后，将玻片置于潮湿的盛有TEMED的容器中，在真空状态下当TEMED挥发到玻片表面时，丙烯基团之间会发生共聚合反应，得DNA微阵列芯片，

其中，所述的丙烯酰胺修饰的PCR产物部分由4种引物PCR扩增获得，

其中 引物序列分别为:

SEQ ID NO.1: 5’-CAACTCATCCTTATTCTGAT -3’

SEQ ID NO.2: 5’-丙烯酰胺-CTCATGCCTCCTCTCTAACC-3’

SEQ ID NO.3: 5’-CCGAGCTACCTTTGTGGACT-3’

SEQ ID NO.4: 5’-丙烯酰胺-CACGATGCCCGAGACTAACTAA -3’。

5.根据权利要求4所述的DNA微阵列芯片的制备方法，其特征在于，所述的聚合反应的反应时间为30 -60min，温度为20－30℃，真空度1000 Pa。