[发明专利]一种Gilbert综合征基因突变检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及基因检测试剂盒，具体涉及一种Gilbert综合征基因突变检测试剂盒，属于生物技术领域。

背景技术

Gilbert综合征(Gilbert syndrome，GS)，由Gilbert和Lereboullet在 1901年首次报道，又称体质性肝功能不良性黄疸，是一种常见的遗传性非结合胆红素血症。该病患者由于肝细胞摄取非结合胆红素(unconjugated bilirubin, UCB)功能障碍及微粒体内葡萄糖醛酸转移酶（uridine diphosphate glucuronosyl transferase，UGT）不足，导致血中UCB增高而出现黄疸。患者主要表现为以间接胆红素升高为主的非溶血性间歇性黄疸，一些患者可出现乏力、消化不良、肝区不适和脂肪不耐受。

随着分子生物学技术的发展，人们对Gilbert 综合征的研究已非常深入。研究发现，胆红素在肝内的代谢主要是通过尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）实现的，UGT1A1基因异常可导致肝脏微粒体的胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶表达下降，从而引起胆红素代谢障碍。目前已在Gilbert 综合征患者及其家系中发现3 种类型的UGT1A1 基因异常，包括远端加强序列即苯巴比妥反应增强元件（PBREM）-3279位点突变，PBREM约位于TATA上游，沈健等人在《胃肠病学》2007年12卷392-396页中的标题为《 1例中国Gilbert综合征家系UGT1A1基因遗传分析.》报道了我国首例PBREM区存在T-3279G突变，此突变与基因转录活性下降导致的胆红素水平升高显著相关；启动子区域TA 盒中TA 碱基序列插入突变，表现为二核苷酸（TA）插入到UGT1A1基因启动子上游约25~35个bp处的TATA盒中，使正常野生型A（TA）6TAA突变为A（TA）7TAA；UGT1A1 基因外显子区域的单碱基突变，包括G71R、G493R、P364L、P229Q、F83L、R367G及Y486D，以核苷酸211位点G→A点突变（G71R）最为频繁，常见于亚洲人。

现有技术中，Gilbert综合征的诊断可采用UGT1A多克隆抗体的肝组织免疫组织化学检查，测定肝内UGT的活性程度，或通过分子生物学技术检测相关的UGT1A基因启动子区TATAA序列的遗传学多态性。目前主要通过PCR测序技术来检测Gilbert综合征基因突变，但是测序价格较贵，因此必须寻找一种应用简单、 结果可靠、价格低廉的技术来开发Gilbert综合征基因检测试剂盒。

DNA微阵列芯片是按照特定的排列方式固定有大量基因探针的硅片、玻片、塑料片，能够高效地大规模获取相关生物信息。DNA微阵列芯片技术是新开发的一种DNA序列变异检测工具，应用领域主要有基因突变及多态性分析、基因测序，疾病诊断和预测、药物筛选等，为现代医学，医学诊断学的发展提供了强而有力的工具。

发明内容

本发明的目的是将DNA微阵列芯片技术应用于Gilbert综合征基因突变检测，开发一种新型的Gilbert综合征基因突变检测试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明包含下述技术方案：

一种Gilbert综合征基因突变检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒由丙烯酰胺修饰的PCR产物及其他成分固定于用丙烯基团修饰的玻片上而制成的DNA微阵列芯片，6种核苷酸探针部分组成， 其中，所述的丙烯酰胺修饰的PCR产物部分由4种引物PCR扩增获得，其中 引物序列分别为:

SEQ ID NO.1: 5’-CAACTCATCCTTATTCTGAT -3’

SEQ ID NO.2: 5’-丙烯酰胺-CTCATGCCTCCTCTCTAACC-3’

SEQ ID NO.3: 5’-CCGAGCTACCTTTGTGGACT-3’

SEQ ID NO.4: 5’-丙烯酰胺-CACGATGCCCGAGACTAACTAA -3’

所述6种核苷酸探针部分序列分别为，

SEQ ID NO.5: 5’-TTCTGTTTGAAGA -3’

SEQ ID NO.6: 5’ -TTCTGTGTGAAGA -3’

SEQ ID NO.7: 5’ -GCCATATATATATATATAAG-3’

SEQ ID NO.8: 5’ -GCCATATATATATATATATAAG -3'

SEQ ID NO.9: 5’ - AGAG TCGGAGCTT -3’