[发明专利]酶催化反应生产过氧乙酸的方法

权利要求书

1.具有SEQ ID NO:1 代表的氨基酸序列的乙酰木聚糖酯酶在过水解反应中的应用。

2.一种酶催化生产过氧乙酸的方法，以乙酰基底物和过氧化氢为底物，其特征在于，以权利要求1所述的乙酰木聚糖酯酶为酶催化剂，与底物接触进行过水解反应生成过氧乙酸。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以含权利要求1所述的乙酰木聚糖酯酶的载体为酶催化剂，与底物接触进行过水解反应生成过氧乙酸。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述乙酰基底物选自乙酸乙酯、甘油一乙酸酯、甘油二乙酸酯、甘油三乙酸酯中的一种。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述过水解反应体系中，以毫克每毫升计，所述乙酰基底物：过氧化氢：酶的数量比例关系为1：0.5-8.5：1.5-75。

6.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述过水解反应的反应条件为：pH值6.5-9.5，优选为pH 8.0。

7.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述过水解反应的温度为20-37℃，优选20℃。

8.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述过水解反应的反应时间为5分钟到约1小时之内，优选为5分钟之内。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将还包括依据所述蛋白质的编码或氨基酸序列，将所述乙酰木聚糖酯酶表达并获取粗酶液的过程。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，依次包括如下步骤：

（1）以大肠杆菌（Escherichia coli）BL21/pET-CAH，为出发菌株进行种子培养；其中该大肠杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2012408；其中，种子培养培养基为LB培养基；培养条件为：250 mL三角瓶，装液量50 mL，培养温度37℃，摇床转速200 r/min，培养12 h；

(2) 发酵培养，发酵培养基组成为液体LB培养基；培养条件为，按照体积比为1.5%接种量接种种子培养液，发酵温度37 ℃，当OD达到0.6~0.8时，加异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导，IPTG的终浓度1.0 mmol/L，摇床转速180~250 r/min，发酵2-10 h；

(3) 粗酶液的获取，取出发酵液，8000rpm离心3min，加入1/8 原发酵液体积的Tris-HCl（pH 7.0），浓缩8倍；超声破碎400W、3s 工作时间，7s 间隙时间，超声4min；离心6500 rpm、10 min，上清即为粗酶液。