[发明专利]1,3-二羟基丙酮的重组基因工程菌的构建与应用在审
| 申请号： | 201510178805.X | 申请日： | 2015-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN104845999A | 公开（公告）日： | 2015-08-19 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 徐州奥格曼新材料科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12P7/26;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 221112 江苏省徐州市鼓楼区黄*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 羟基 丙酮 重组 基因工程 构建 应用 | ||
【权利要求书】：
1.本发明涉及1,3-二羟基丙酮的重组基因工程菌的构建，其制备方法包括：
（1）以产气气杆菌(Aerobacter aerogenes)基因组DNA为模板，运用PCR扩增得到编码甘油脱氢酶（GDH）的基因（gldA）；
（2）克隆到大肠杆菌表达载体pBluescript SK-上，构建克隆载体pSK-gldA；
（3）pSK-gldA在E.Coli ＪＭ１０９中表达。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于PCR扩增条件为：97℃预变性10min，94℃变形60s，58℃退火30s，72℃延伸60-120s，30个循环后72℃延伸10min。
3.利用权利要求1所述的重组基因工程菌制备1,3-二羟基丙酮的方法，包括：
（1）对所述重组基因工程菌进行发酵；
（2）分离发酵液，提取目的产物1,3-二羟基丙酮。
4.根据权利要求3所述的方法，其中重组产1,3-二羟基丙酮的发酵阶段发酵条件为在含有甘油的培养基中发酵合成1,3-二羟基丙酮，发酵的工艺技术条件为温度30℃～37℃、130r/min振荡培养72h。
5.根据按照权利要求3所述的方法，其特征在于发酵液先经过滤分离催化酶重复使用，利用乙酸丁酯萃取滤后发酵液，再将萃取液浓缩后，利用乙酸丁酯与石油醚按体积比1：3～4的组合溶剂重结晶，获得产品1,3-二羟基丙酮。
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