[发明专利]一种重组单纯疱疹病毒的肝素亲和层析方法

权利要求书

1. 一种重组单纯疱疹病毒的肝素亲和层析方法，其特征在该方法包括如下步骤：

(I). 病毒上清在双羟色胺Tuffryn R聚砜胶囊过滤设备中滤除细胞碎片；

(II). 使用2L的聚醚砜膜盘式搅拌细胞超滤装置进行过滤浓缩，用肝素亲和吸附缓冲液进行富集截留，浓缩液冻存于-80度冰箱；

(III). HR 5/5 层析柱填装肝素，再将浓缩后的样品解冻装入层析柱中；

(IV). pH 7.5、浓度为33mM的 NaCl在153cm/h下线性流速洗脱；

(V). 收集三个峰值洗脱液，冻存于-80度或液氮中。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(I)中用到的是双 羟色胺TuffrynR聚砜膜0.45/0.2Am胶囊 过滤设备。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(I)中超滤装置在工作中的外压应小于0.01mPa，速度为50mL/min 。

4.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于过滤器的有效面积为162平方厘米，截留分子量为30万。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(II)1L病毒上清浓缩需要20倍恒定氮气压力和33.5cm/s的速度 。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(II)中使用肝素亲和吸附缓冲液，其配方为150 mM NaCl in 20 mMTris-HCl buffer，pH 7.5。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(III)中适合于亲和层析的层析柱填柱材料为tentacle-type FractogelR EMD 肝素(S)，Fractogel  EMD DEAE (M) ，和Fractogel EMD SO₃- (M) gels。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(III)中层析柱填充完后要用20mM HEPES buffer, pH 7.5缓冲液在无盐条件下平衡。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在步骤(III)中逐步洗脱所用NaCl的浓度和体积分别为150 mM，19.5 倍层析柱体积的NaCl，进行病毒获取和漂洗；350nM，13倍层析柱体积的NaCl进行病毒洗脱以及1200mM ，7.5 倍层析柱体积的NaCl进行最终高严格漂洗。

10.根据权利要求1，12或13所述的方法，其特征在步骤(IV)中洗脱液NaCl的线性流量运行率为153cm/h。