[发明专利]L-赖氨酸基因工程生产菌有效
| 申请号： | 201510185330.7 | 申请日： | 2015-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN104878034B | 公开（公告）日： | 2018-04-27 |
| 发明（设计）人： | 杨晟;蒋宇;孙兵兵;陈飚;杨俊杰 | 申请（专利权）人： | 上海工业生物技术研发中心;中国科学院上海生命科学研究院湖州工业生物技术中心 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12P13/08 |
| 代理公司： | 上海华工专利事务所(普通合伙)31104 | 代理人： | 缪利明 |
| 地址： | 201201 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 赖氨酸 基因工程 生产 | ||
1.一种L-赖氨酸基因工程生产菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、敲除原始菌株中与L-赖氨酸代谢途径相关的基因，获得基因敲除菌株，所述敲除的基因为：cadA、ldcC、gltI、thrC、cynT、thrL和maeB；
B、增强步骤A中所述基因敲除菌株中与L-赖氨酸代谢途径相关的基因，获得基因增强菌株，所述增强的基因为：ybjE和cyo operon；
C、构建包含过表达原始菌株中与L-赖氨酸代谢途径相关的基因的重组质粒，所述过表达的基因为：第118位H突变为Y的dapA、第318位M突变为I和第323位G突变为D的lysC、第114位I突变为T的dapB、ddh、ppc、aspA、pntAB和asd；
D、将步骤C中所述重组质粒导入步骤A中所述基因敲除菌株和/或步骤B中所述基因增强菌株中，获得L-赖氨酸基因工程生产菌，
所述原始菌株为大肠杆菌。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、敲除原始菌株中与L-赖氨酸代谢途径相关的基因，获得基因敲除菌株，所述敲除的基因为cadA、ldcC、gltI、thrC、cynT、thrL和maeB；
B、增强步骤A中所述基因敲除菌株中与L-赖氨酸代谢途径相关的基因，获得基因增强菌株，所述增强的基因为ybjE和cyo operon；
C、构建包含过表达原始菌株中与L-赖氨酸代谢途径相关的基因的重组质粒，所述过表达的基因为第118位H突变为Y的dapA、第318位M突变为I和第323位G突变为D的lysC、第114位I突变为T的dapB、ddh、ppc、aspA、pntAB和asd；
D、将步骤C中所述重组质粒导入步骤B中所述基因增强菌株中，获得L-赖氨酸基因工程生产菌。
3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌MG1655。
4.如权利要求1-3中任一项方法构建获得的L-赖氨酸基因工程生产菌。
5.如权利要求4所述的L-赖氨酸基因工程生产菌，其特征在于，保藏号为CCTCC M 2015232。
6.一种L-赖氨酸的生产方法，其特征在于，通过发酵如权利要求4或5所述的L-赖氨酸基因工程生产菌生产。
7.如权利要求6所述的生产方法，其特征在于，所述发酵的发酵培养基组成如下：葡萄糖20g/L，(NH4)2SO4 16g/L，KH2PO4 1.0g/L，MgSO4·7H2O 1.0g/L，FeSO4·7H2O 0.01g/L，MnSO4·7H2O 0.01g/L，酵母粉2g/L，CaCO3 30g/L，KOH调pH7.0。
8.如权利要求4或5所述的L-赖氨酸基因工程生产菌用于生产L-赖氨酸的应用。
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