[发明专利]在真核细胞中生产琥珀酸在审
申请号: | 201510186003.3 | 申请日: | 2008-11-14 |
公开(公告)号: | CN104818224A | 公开(公告)日: | 2015-08-05 |
发明(设计)人: | 瑞内·维尔瓦尔;吴亮;罗波图斯·安东尼厄斯·戴维尔德;科尼利斯·玛丽亚·雅各布斯·沙吉 | 申请(专利权)人: | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 |
主分类号: | C12N1/19 | 分类号: | C12N1/19;C12N1/15;C12P7/46;C12R1/865;C12R1/685 |
代理公司: | 北京东方亿思知识产权代理有限责任公司 11258 | 代理人: | 肖善强 |
地址: | 荷兰*** | 国省代码: | 荷兰;NL |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 真核细胞 生产 琥珀酸 | ||
1.包含下述核苷酸序列的选自酵母和丝状真菌的重组真核细胞,所述核苷酸序列编码催化延胡索酸转化成琥珀酸的NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶。
2.根据权利要求1的细胞,其中所述细胞表达编码催化琥珀酸形成的酶的核苷酸序列,其中所述核苷酸序列编码NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶,所述延胡索酸还原酶包含与SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少40%序列同一性的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2的细胞,其中所述NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶来自Trypanosoma sp。
4.根据权利要求1到3中任一项的细胞,其中编码NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶的所述核苷酸序列表达后,所述NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶在胞质溶胶中有活性。
5.根据权利要求1到4中任一项的细胞,其中所述细胞过量表达编码丙酮酸羧化酶的核苷酸序列。
6.根据权利要求1到5中任一项的细胞,其还包含编码异源磷酸烯醇丙酮酸羧激酶的核苷酸序列。
7.根据权利要求1到6中任一项的细胞,其还包含编码下述苹果酸脱氢酶的核苷酸序列,在编码苹果酸脱氢酶的核苷酸序列表达后,所述苹果酸脱氢酶在胞质溶胶中有活性。
8.根据权利要求1到7中任一项的细胞,其还包含编码下述酶的核苷酸序列,在编码催化苹果酸转化成延胡索酸的酶的核苷酸序列表达后,所述酶在胞质溶胶中催化苹果酸转化成延胡索酸。
9.根据权利要求1到8中任一项的细胞,其还包含编码二羧酸转运蛋白的核苷酸序列。
10.根据权利要求1到9中任一项的细胞,其中至少一个编码醇脱氢酶的基因是无功能的。
11.根据权利要求1到10中任一项的细胞,其中至少一个编码甘油-3-磷酸脱氢酶的基因是无功能的。
12.根据权利要求1到11中任一项的细胞,其中至少一个编码琥珀酸脱氢酶的基因是无功能的。
13.根据权利要求1到12中任一项的细胞,其为Aspergillus,优选地为Aspergillus niger。
14.根据权利要求1到12中任一项的细胞,其为Saccharomyces cerevisiae。
15.用于制备琥珀酸的方法,包括在合适的发酵培养基中发酵根据权利要求1到14中任一项的真核细胞,其中,琥珀酸被制备。
16.根据权利要求15的方法,其中制备的琥珀酸用于生产药物、化妆品、食物、饲料或化学制品。
17.包含能够通过根据权利要求16的方法获得的琥珀酸的发酵液。
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