[发明专利]定性定量分析禽用禽流感病毒抗原有效成分的方法

权利要求书

1.一种定性定量分析禽用禽流感病毒抗原有效成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备含PEG-6000的免疫琼脂板；

(2)样品处理；

(3)加样扩散；

(4)漂洗、干燥、染色、脱色；

(5)测量，绘制标准抗原回归曲线，计算浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫琼脂板中PEG-6000的浓度为2％-3％。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述免疫琼脂板中含标准抗体。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的样品包括标准抗原和待测样品；所述标准抗原为标准禽流感灭活病毒抗原，经稀释处理形成浓度梯度；所述待测样品为禽用禽流感成品疫苗或禽流感灭活病毒抗原。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述待测样品为禽用禽流感成品疫苗时，处理方法如下：

将苯酚按1/5比例加入禽用禽流感成品疫苗中，充分震荡混匀后，10000rpm离心3分钟，取上清水相4℃保存备用待检。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)具体为：将梯度稀释的标准抗原、待检样品和阴性对照在免疫琼脂板中加样；扩散条件为：20-25℃反应12h-16h。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，步骤(4)中的所述漂洗为：将免疫琼脂板放入PBS中室温浸泡2h，期间换PBS缓冲液3-5次。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(4)中的所述干燥为：从PBS中取出免疫琼脂板，用粗滤纸吸取免疫琼脂板水分30min以上，放入56℃干燥至滤纸完全干燥。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(4)中的所述染色为：用0.5％考马斯亮蓝溶液染色干燥的免疫琼脂板4-6min；所述脱色为：用脱色液脱色15min以上直至沉淀圈外蓝色脱掉，期间适当换脱色液。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)具体为：用数显游标卡尺测量沉淀圈；以标准抗原形成的沉淀环的直径对其相应的抗原浓度作回归曲线，得到直线回归方程y＝ax+b，代入待检样品孔的沉淀环平均直径，即得到待检样品抗原的含量；

其中，y为标准品或样品的沉淀环直径，x为标准品或样品的抗原含量，R²>0.85。