[发明专利]肉桂酰中性红酰胺(CA‑PZ)及其制备与应用

说明书

技术领域：

本发明属于医药技术领域，涉及一种新的组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂及其应用。

背景技术：

组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂作为抗癌药物，是具有潜在治疗作用的一种新兴类别。目前，两个HDACIs-伏立诺他(辛二酰苯胺异羟肟酸，ZOLINZA)和缩肽(罗米地辛，ISTODAX)已获得美国食品和药物管理局(FDA)的批准用于治疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)，以及缩酚酸肽获得FDA批准用于治疗外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。HDAC的失调可以改变表型和基因表达，干扰体内平衡并有助于肿瘤增长。HDAC抑制剂家族是庞大的，并且是多样化的。目前已确定18种哺乳动物的HDAC，这些亚型通常在细胞核内表达。虽然组蛋白广泛代表它们的主要靶点，但是这些亚型还是显示出组织特异性分布，并在细胞核和细胞质之间穿梭。

此外，在已知的内吞作用路线中，巨胞饮为进入细胞提供了一个有趣的途径，由于它是一种大量摄取的形式，因而可以有效地吸收和内化靶向药物。通过巨胞饮内化基于抗体的靶向疗法，可能对多种人类癌症提供额外的肿瘤特异性。已发现膜皱褶形成、巨胞饮和细胞迁移都是在HDAC6-缺损的细胞中受损。相反，HDAC6水平升高则促进膜皱褶形成，伴随巨胞饮和能动性增加。

另一方面，HDAC抑制剂的毒性主要表现在腹泻、骨髓抑制和心脏QT间期持久性的副作用。大部分HDAC抑制剂在血浆中的半衰期是2-8小时并将发生肝代谢和随后的肠排泄。由于存在的毒副作用，HDAC抑制剂的广泛应用仍然受到限制。因此，寻找新的具有良好作用同时毒性较低的HDAC抑制剂已经成为当务之急。

肉桂酸(Cinnamic acid，tCA)，属肉桂的成分(樟科属)，具有广谱的生物活性，包括抗氧化、抗炎和抗癌等特性。肉桂酸显示对黑色素瘤细胞与肺癌细胞有抗增殖活性。有研究发现，肉桂酸本身针对黑色素瘤细胞和成胶质细胞瘤等可抑制细胞增殖。

在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红(NR)并向液泡中排泌。由于液泡在一般情况下呈酸性反应，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，所以中性红溶液用于细胞中液泡的染色，可以鉴定细胞的存活情况。

本实验室利用中性红的这一特性与肉桂酸缩合，制备形成新的化合物肉桂酰中性红酰胺(CA-PZ)，通过中性红的氨基与肉桂酸的羰基连接，可以将肉桂酸更多地带进细胞，以发挥其抗肿瘤作用，并验证其是否与巨胞饮和HDAC有关联。

本发明所涉及的化合物是经大胆设想，利用中性红将含羰基的肉桂酸有效成分更多地带入细胞，惊喜地发现所述化合物具有良好的抗肿瘤作用，几乎无毒副作用，并且是通过巨胞饮大量进入细胞内，从而抑制靶点位于胞内的HDAC发挥作用，有望成为一种具有抗肿瘤作用及开发价值的HDAC抑制剂。本发明所述CA-PZ在制备抗肿瘤药物中的应用，迄今尚未见有相关报道。

本发明的目的之一是，提供一种肉桂酰中性红酰胺CA-PZ化合物；

本发明的目的之二是，提供所述化合物CA-PZ的制备方法；

本发明的目的之三是，提供所述化合物CA-PZ在肿瘤治疗中的应用。

发明内容：

本发明提供了式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物：

所述的CA-PZ是一种紫红色结晶状物质，分子式为C₂₄H₂₂N₄O，分子量为382，其特征是，肉桂酸的羰基和中性红的氨基缩合，形成稳定的酰胺结构。HPLC检测在11.773分钟出现吸收峰，峰高为403207，曲线下面积百分比为95.413％。式(1)所述化合物，至今尚未见其具有HDAC抑制活性的报道，也未见该化合物具有其他生物活性的报道。

本发明提供了式(1)所述化合物的制备方法，其包括以下步骤：干燥反应瓶中投入定量中性红、适量N，N-二甲基甲酰胺(DMF)和干燥吡啶，室温搅拌下加入相应量的肉桂酰氯，从室温开始缓缓加热升温至50-65℃进行反应，用TLC硅胶薄层60F₂₅₄检测其反应终点。约48-96小时反应完毕后，将反应液减压蒸馏至干燥。余留物分别用苯、乙醚搅拌提取杂质。过滤、干燥得肉桂酰中性红酰胺粗产物。经硅胶柱层析分离纯化后，制得结晶性产物CA-PZ。经HPLC、质谱和核磁检测结果，确证为化合物CA-PZ。

本发明还提供了式(1)化合物CA-PZ在制备抗肿瘤药物中的应用。