[发明专利]一种米根霉的发酵培养方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地涉及一种米根霉的发酵培养方法。

背景技术

农作物秸秆是地球上第一大可再生资源，我国拥有量居世界首位。全国每年产生的大约6亿多吨农作物秸秆中，通过机械化还田和堆沤腐熟还田利用农作物秸秆2亿吨左右，采用青贮、氨化等过腹还田方式利用2亿吨左右，另外还有少量农作物秸秆用于气化和加工等，秸秆总量的2/3已基本实现了综合利用，还有约1/3、即2亿吨左右剩余秸秆尚未得到综合利用，一些农民采取了最简单的处理方式-焚烧，造成了大气污染、土壤矿化、火灾事故等大量的社会经济和生态问题，引起了全社会的广泛关注。

秸秆本身主要有纤维素、半纤维素和木质素三种物质组成，还含有少量蛋白质和矿物元素，是一种良好的微生物生长基质。而米根霉是中国药和酒曲中的重要霉菌之一 ，可产生大量的淀粉酶、糖化酶、蛋白酶，分解秸秆中的纤维素和半纤维素，将其转化为乳酸等有机酸，但是目前该菌种用于农林废弃物的发酵软化处理的应用较少。

发明内容

针对目前农林废弃物自然发酵效率慢的状况，本发明的目的是提供了一种米根霉的发酵培养方法，具体可以适用于米根霉培养，本发明是通过实验验证筛选到的米根霉菌株JHSW01用此发酵培养方法可以取得良好的技术效果，发酵菌种没有毒副作用，米根霉发酵快，菌体生长营养要求简单，而且发酵方法简易，具有良好的市场应用前景。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

一种米根霉的发酵培养方法，它包括以下步骤：

（1）将米根霉接种到种子培养基中进行种子培养获得种子培养液；

（2）将所述种子培养液接种到固体培养基中进行发酵培养获得米根霉菌株发酵菌剂。

所述米根霉为米根霉菌株JHSW01，其分类命名为Rhizopus oryzae，其保藏编号为CCTCC M 2015189。

进一步的：所述步骤（1）中种子培养的条件为：20~40℃，pH6~10，转速100~200rpm，时间24~72h。

进一步的：所述步骤（1）中种子培养基组成为：将5~30g/L的麦芽糖和2~30g/L酵母粉添加到农林废弃物提取液中，调整pH7.0~8.0。

进一步的：所述农林废弃物提取液的制备过程为：取农林废弃物粉末按照质量体积比1：5~1：10的比例加入到水中，调节pH至9，蒸煮，过滤获得。

进一步的：所述步骤（2）中发酵培养的条件为：湿度大于90%，温度20~35℃，pH7~10。

进一步的：所述步骤（2）中的固体培养基组成为：按照质量比农作物秸秆粉末：林业废弃物粉末：氮源= 5~8：2~3：1~2将三种组分混匀。

进一步的：所述步骤（2）中发酵培养48~72小时。

进一步的：所述发酵菌剂为固液混合发酵料曲、干发酵料曲、发酵上清液或湿发酵料曲。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：本发明从腐烂秸秆中筛选到一株米根霉菌株JHSW01，经实验验证将其发酵培养具有产生高糖化酶活、纤维素酶活和产有机酸的能力，还可以有效的促进纤维素和半纤维素分解转化；本发明菌种固态法生产中可以耐受高温和具有广泛的pH生长范围，在农林废弃物的堆腐发酵过程中具有较长的繁殖发酵时间；本发明所述的米根霉菌株JHSW01采用的培养基配方简易易于配制，有利于工业生产的成本节省；本发明菌种培养条件简单易于控制，便于工业化应用，所以具有良好的市场应用前景。

结合本发明的具体实施方式后，本发明的其他特点和优点将变得更加清楚。

附图说明

图1是本发明中米根霉JHSW01的平板培养图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细的说明。

实施例1

一、米根霉菌株JHSW01的分离筛选

2010年7月4日从山东沂南大庄小麦腐烂秸秆中取样50余份，分别取6g样品粉末浸泡在50 mL生理盐水中，20℃条件下，每2h震荡一次。分别取100μL样品悬浮液在营养琼脂平板均匀涂布，28℃恒温培养箱中培养3~7d，挑取形态典型的单菌落用划线法接种到营养琼脂平板上，通过反复多次划线得到纯菌，共筛选出8株霉菌。