[发明专利]一种检测猪早孕因子胶体金检测试纸卡及其制备方法在审
申请号: | 201510193313.8 | 申请日: | 2015-04-22 |
公开(公告)号: | CN104865381A | 公开(公告)日: | 2015-08-26 |
发明(设计)人: | 张国祖;王兴涛;马霞;王林;杨帅;刘梅 | 申请(专利权)人: | 河南省康星药业股份有限公司 |
主分类号: | G01N33/574 | 分类号: | G01N33/574;G01N33/531;G01N33/543 |
代理公司: | 北京众元弘策知识产权代理事务所(普通合伙) 11462 | 代理人: | 安娜 |
地址: | 451464 河南省郑州市*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 早孕 因子 胶体 试纸 及其 制备 方法 | ||
技术领域
本发明涉及动物医学免疫检测、诊断领域,具体是涉及一种检测猪早孕因子的胶体金试纸卡及其制备方法。
背景技术
运用早期妊娠诊断方法对提高母猪繁殖效率和养猪业生产效益的十分有帮助,母猪配种后,如果能够尽早的进行妊娠确诊,就能够减少母猪的空怀期或非繁殖天数,增加母猪的平均年产仔窝数,同时有利于对繁殖障碍母猪的及早治疗处理。而现在普遍采用的早期妊娠诊断方法中有的诊断准确率不稳定、有的操作方法步骤繁琐、有的使用仪器昂贵、有的对操作人员经验要求高,在众多检测方法中快速试纸检测能够具备操作简单、灵敏性高、特异性好、价格低廉等诸多优点而具备推广应用价值。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种猪早孕因子胶体金检测试纸卡,快速检测母猪早孕因子,用于母猪早期妊娠的临床诊断。本发明创新点在于利用基因克隆技术,人工合成具有天然早孕因子活性的猪早孕因子蛋白,在此基础上得到敏感性高、特性好的鼠源猪早孕因子单克隆抗体,经过试纸卡组装得到猪早孕因子胶体金检测试纸卡。
本发明所采用的技术方案是:
1、猪早孕因子胶体金检测试纸卡,其特征在于:
所述的猪早孕因子胶体金检测试纸卡由胶体金试纸条和扣板式卡槽组成;扣板式卡槽具有一个容置胶体金试纸条的内置空腔,且扣板式卡槽上设置有观察区和加样区;胶体金试纸条主要由支持板、NC膜(硝酸纤维素膜)、金标单克隆抗体垫、样品垫和吸收垫组成;
所述的NC膜设置在支持板的中部,NC膜一侧的支持板上依次粘贴有含有金标单克隆抗体垫和样品垫,NC膜另一侧的支持板上粘贴有吸收垫;
所述NC膜的中部有一条含有猪早孕因子多克隆抗体的检测线和一条含有羊抗鼠二抗的质控线;
胶体金试纸条设置在卡槽的内置空腔内,卡槽的观察区对应胶体金试纸条的显色区,加样孔对应胶体金试纸条的样品垫;
所述载样垫中金标单克隆抗体为鼠源猪早孕因子单克隆抗体;所述NC膜中猪早孕因子抗体为兔抗猪早孕因子多克隆抗体;所述NC膜中羊抗鼠二抗为羊抗鼠IgG抗体。
2、上述的猪早孕因子胶体金检测试纸卡的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)制备NC膜
兔抗猪早孕因子多克隆抗体的制备:采用原核表达并纯化的猪早孕因子蛋白作为免疫原,提取IgG抗体,制备多克隆抗体;
检测线的制备:采用三维喷膜仪,调整喷液量为45~50dots/mL/cm,用包被缓冲液稀释兔抗猪早孕因子多克隆抗体,浓度为45~50μg/mL,在NC膜中适当位置划线,即为检测线,晾干备用;所述的包被缓冲液为经过0.40~0.45μL滤膜过滤的0.05~0.07M、pH9.6的CBS缓冲液(碳酸盐缓冲液);
质控线的制备:采用三维喷膜仪,调整喷液量为45~48dots/ml/cm,用包被缓冲液稀释羊抗鼠IgG抗体,浓度为1mg/ml,在NC膜上与检测线平行的位置划线,与检测线间隔4~5mm,即为质控线;
NC膜组装制备:晾干检测线和质控线,得到含有检测线和质控线的NC膜;用封闭工作液将制备的NC膜于室温72h晾干,封存备用;所述的封闭工作液为含质量百分比的2.5%BSA、2.5~3.0%脱脂奶粉和0.01M、pH7.0的CBS缓冲液混合后用0.45~0.48ul滤膜过滤得到的封闭工作液。
(2)制备涂覆金标单克隆抗体垫
用20mM含质量百分比为1.5%BSA、0.1%NaN3和3%四硼酸钠稀释缓冲液(水溶液)将金标单克隆抗体稀释至终浓度0.05mg/ml;裁取规格为300×7mm的玻璃纤维棉,将金标单克隆抗体溶液用单向喷点仪,以5μL/cm的速度(大约20ng/条),均匀喷洒于玻璃纤维棉上,56℃干燥1h,加入干燥剂真空密封后,室温保存备用。
(3)组装猪早孕因子胶体金检测试纸卡
将涂有检测线和质控线的NC膜粘贴在支持板的中部,在NC膜的一侧依次粘贴含有金标单克隆抗体的玻璃纤维膜和样品垫,在NC膜的另一侧粘贴吸收垫,得到试纸板,将试纸板切割成不同宽度的试纸条,将试纸条安放于卡槽中即为猪早孕因子胶体金检测试纸卡。
(4)猪早孕因子胶体金检测试纸卡使用及判定
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