[发明专利]一种利用牡蛎体腔液中淋巴细胞检测牡蛎倍性的方法有效
申请号: | 201510194867.X | 申请日: | 2015-04-22 |
公开(公告)号: | CN104818327B | 公开(公告)日: | 2018-03-16 |
发明(设计)人: | 李军;张扬;张跃环;喻子牛 | 申请(专利权)人: | 中国科学院南海海洋研究所 |
主分类号: | C12Q1/04 | 分类号: | C12Q1/04 |
代理公司: | 广州科粤专利商标代理有限公司44001 | 代理人: | 刘明星 |
地址: | 510301 *** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 牡蛎 体腔 淋巴细胞 检测 方法 | ||
1.一种利用牡蛎体腔液中淋巴细胞检测牡蛎倍性的方法,其特征在于,具体步骤为:
a、淋巴液抽取:将牡蛎样品放置于海水中,当其自然张开双壳时,利用注射器插入体腔中,取体腔液;
b、离心重悬:将体腔液在转速为800-1200r/min条件下离心后去除上清液,加入海水悬浮,采用孔径为50-100μm的滤网过滤,得淋巴细胞;
c、细胞核染色:将淋巴细胞用DAPI染液染色;
d、染色后的样品混合均匀后检测其DNA含量,确定牡蛎样品的倍性组成。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤a的牡蛎样品是壳高为30mm以上的牡蛎。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤c的将淋巴细胞用DAPI染液染色是将淋巴细胞放于DAPI染液中,染色2-3min,染色后的样品直接用于DNA含量检测或放置于-20℃冰箱中长期保存,之后进行DNA含量检测。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤d的染色后的样品混合均匀后检测DNA含量是将染色后的样品混合均匀后直接通过流式细胞仪在波长488nm通道下检测DNA含量,确定牡蛎样品的倍性组成。
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