[发明专利]一种去细胞主动脉瓣支架及其制备方法和用途有效
申请号: | 201510201418.3 | 申请日: | 2015-04-27 |
公开(公告)号: | CN104888272B | 公开(公告)日: | 2017-07-21 |
发明(设计)人: | 周建良;徐建军;朱志刚;聂彬恩;丁静丽;陈佳;董啸;钟海军;雷水金 | 申请(专利权)人: | 南昌大学第二附属医院 |
主分类号: | A61L27/36 | 分类号: | A61L27/36 |
代理公司: | 北京格旭知识产权代理事务所(普通合伙)11443 | 代理人: | 雒纯丹 |
地址: | 330006 *** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 细胞 主动脉 支架 及其 制备 方法 用途 | ||
1.一种去细胞主动脉瓣支架的制备方法,其特征在于,包含如下步骤:
(1)将动物的主动脉瓣置于含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中处理,其中,所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中聚乙二醇-聚己内酯的浓度为0.5~2%(w/v);
以及
(2)将所述的主动脉瓣置于含核酸酶的缓冲液中处理,其中所述的含核酸酶的缓冲液包含0.1mg/mL~0.3mg/mL的脱氧核糖核酸酶Ⅰ和10μg/mL~30μg/mL核糖核酸酶A。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中聚乙二醇-聚己内酯的浓度为1%(w/v)。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述的主动脉瓣在所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中,于常温~37℃、50~100rpm振荡处理12~36小时。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述的主动脉瓣在所述的核酸酶缓冲液中,于常温~37℃、50~100rpm振荡处理2~4小时。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述的主动脉瓣在所述的核酸酶缓冲液中,于常温~37℃、50~100rpm振荡处理2~4小时。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)前,首先将所述的动物的主动脉瓣置于4℃含抗生素的培养基中培养12~24小时。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述的培养基为高糖DMEM培养基,其中抗生素含量为青霉素80U/mL~120U/mL和链霉素80U/mL~120U/mL。
8.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液。
9.根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液的浓度为0.01mol/L~0.02mol/L。
10.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述的主动脉瓣在所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中振荡处理的温度为37℃。
11.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述的主动脉瓣在所述的核酸酶缓冲液中振荡处理的温度为37℃。
12.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的制备方法还包括如下步骤:将步骤(1)得到的主动脉瓣置于缓冲液中,于常温~37℃、50~100rpm振荡清洗12~36小时。
13.根据权利要求12所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)得到的主动脉瓣置于缓冲液中振荡清洗的温度为37℃。
14.根据权利要求12或13所述的制备方法,其特征在于,用于振荡清洗的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液。
15.根据权利要求14所述的制备方法,其特征在于,用于振荡清洗的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液,所述的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液的浓度为0.03~0.08mol/L。
16.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的聚乙二醇-聚己内酯的分子量为4000~6000,其中聚乙二醇链段的分子量为2000~3000。
17.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的聚乙二醇-聚己内酯通过包括如下步骤的方法制备得到:
在氮气环境下,以聚乙二醇和ε-己内酯为原料,以辛酸亚锡为催化剂,90~100℃加热得到聚乙二醇-聚己内酯。
18.聚乙二醇-聚己内酯作为去细胞试剂在构建组织工程心脏瓣膜支架材料中的应用。
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