[发明专利]一种去细胞主动脉瓣支架及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及医学材料技术领域，具体涉及一种组织工程心脏瓣膜去细胞支架材料及其制备方法和用途。

背景技术

目前组织工程心脏瓣膜的研究主要是集中在以下几方面：瓣膜支架制备及改性，种子细胞的选择及培养，种子细胞与瓣膜支架材料的相互作用。而瓣膜支架的制备是整个组织工程心脏瓣膜研究的前提，因此制备性能良好的瓣膜支架至关重要。

去细胞基质由于其良好的生物相容性，并可为种子细胞黏附、增殖、分化等提供类似于体内的基质微环境，在组织工程学中得以广泛应用。目前，去细胞的组织工程心脏瓣膜支架大多为动物的去细胞心脏瓣膜和去细胞心包，因其具有良好的生物学和力学性能，且来源广泛，价格低廉，被越来越多的应用于组织工程心脏瓣膜研究。理想的去细胞瓣膜支架应保持瓣膜细胞外基质的完整性、良好的生物相容性、三维立体超微多孔结构，进而为种子细胞和组织生长提供足够的空间条件，这些特点都是合成材料很难模仿的。

应用去细胞瓣膜支架材料构建组织工程心脏瓣膜，瓣膜的去细胞是至关重要的一步。根据去细胞方法性质的不同，可以大体上将其分为物理、化学和酶学方法，在实际的工作过程中，根据需要也可以将不同的去细胞方法或者不同的试剂联合应用，以得到接近理想去细胞瓣膜的效果。目前去细胞常用的物理方法包括快速冻融，声波降解等，化学方法常用试剂有曲拉通、脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、吐温20等，酶学方法常用酶为低浓度的胰蛋白酶。但目前应用最多的是化学方法中的表面活性剂，阳离子表面活性剂的毒 性最大，其次是阴离子表面活性剂，非离子表面活性剂最小，但去污能力以非离子表面活性剂最强，其次是阴离子表面活性剂。

目前去细胞技术还不成熟，所有的去细胞方法都会导致瓣膜结构的破坏和表面成分的潜在丢失，在一定程度上加速瓣膜的变性和钙化，并且常用的去细胞试剂都具有一定的毒性，且去细胞时间较长大多需48小时甚至更长，单纯的表面活性剂用于瓣膜及其类似组织去细胞效果往往不理想，很难保证细胞去除完全和同时保证瓣膜及类似组织的细胞外基质的完整性及机械性能不会变化。因此寻求一种试剂用于心脏瓣膜去细胞，对于构建去细胞组织工程心脏瓣膜支架尤为必要。

发明内容

本发明所解决的技术问题是：现有技术的去细胞方法都会导致瓣膜结构的破坏和表面成分的丢失，一定程度上加速瓣膜的变性和钙化，而且会产生一定的毒性。

为了解决上述问题，需要一种去细胞主动脉瓣支架，使其具备天然心脏瓣膜的相关性能，同时安全无毒。本发明的目的在于提供一种去细胞主动脉瓣支架，使其具备天然心脏瓣膜的相关性能，同时安全无毒，DNA含量大幅降低，极大的减少瓣膜植入体内后的免疫排斥反应。

具体来说，本发明提供了如下技术方案：

一种去细胞主动脉瓣支架，其经聚乙二醇-聚己内酯处理动物的主动脉瓣得到。

优选的，所述的主动脉瓣支架，其通过包含如下步骤的方法制备得到：

(1)将动物的主动脉瓣置于含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中处理；

以及

(2)将所述的主动脉瓣置于含核酸酶的缓冲液中处理。

优选的，所述的动物为哺乳动物。

一种去细胞主动脉瓣支架的制备方法，其包含如下步骤：

(1)将动物的主动脉瓣置于含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中处理；

以及

(2)将所述的主动脉瓣置于含核酸酶的缓冲液中处理。

优选的，步骤(1)前，首先将所述的动物主动脉瓣置于4℃含抗生素的培养基中培养12～24小时。

优选的，所述的培养基为高糖DMEM培养基，其中抗生素含量为青霉素80U/ml～120U/ml和链霉素80μg/ml～120μg/ml。

优选的，步骤(1)中所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液。

优选的，步骤(1)中所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液。

优选的，所述的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液的浓度为0.01mol/L～0.02mol/L。

优选的，步骤(1)中所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中聚乙二醇-聚己内酯的浓度为0.5～2％(w/v)。

优选的，步骤(1)中所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中聚乙二醇-聚己内酯的浓度为1％(w/v)。

优选的，步骤(1)中，所述的主动脉瓣在所述的含聚乙二醇-聚己内酯的缓冲液中，于常温～37℃、50～100rpm振荡处理12～36小时。