[发明专利]适应于无血清培养和悬浮培养的MDCK来源的细胞系与利用该细胞制备疫苗病毒的方法

权利要求书

1.一种马丁达比犬肾传代细胞(MDCK)来源的细胞系，该MDCK来源的细胞系为MDCKSky1023(DSM ACC3112)、MDCK Sky10234(DSM ACC3114)或MDCK Sky3851(DSM ACC3113)。

2.根据权利要求1所述的MDCK来源的细胞系，其中，与保藏的编号为ATCC CCL-34的MDCK细胞相比，所述MDCK来源的细胞系具有低致瘤性或无致瘤性。

3.根据权利要求1所述的MDCK来源的细胞系，其中，所述MDCK来源的细胞系来源于保藏的编号为ATCC CCL-34的MDCK细胞，该MDCK来源的细胞系不需要用于细胞生长的血清并且通过悬浮培养制备而不需要依附于载体。

4.一种利用权利要求1-3中任意一项所述的MDCK来源的细胞系制备疫苗病毒的方法。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述病毒选自由流感病毒、麻疹病毒、日本脑炎病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、脊髓灰质炎病毒、单纯疱疹病毒-1、单纯疱疹病毒-2、狂犬病毒、呼吸道合胞病毒、3型呼吸道肠道病毒、黄热病毒、细小病毒、柯萨奇病毒、1至47型腺病毒、拉沙病毒和痘苗病毒所组成的组中。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述病毒为流感病毒。

7.一种从细胞培养物中制备流感病毒的方法，该方法包括：

(a)将根据权利要求1-3中任意一项所述的MDCK来源的细胞以1×10⁴个细胞/毫升至1×10⁶个细胞/毫升的浓度接种于无血清培养基中；

(b)使MDCK来源的细胞在一次性生物反应器系统中生长，直至细胞密度至少达到5×10⁶个细胞/毫升，包括在保持选自由40rpm至100rpm的搅拌速率、6.5至7.5的pH和35％至100％的溶解氧(DO)浓度所组成的组中的一个或多个培养条件下培养MDCK来源的细胞；

(c)用流感病毒感染培养的MDCK来源的细胞；

(d)在使流感病毒繁殖的条件下培养已感染的培养的MDCK来源的细胞；和

(e)从细胞培养混合物中分离流感病毒。

8.根据权利要求7所述的方法，所述方法进一步包括在步骤(b)中往细胞培养物中添加新鲜的培养基或用新鲜培养基替换部分培养基。