[发明专利]适应于无血清培养和悬浮培养的MDCK来源的细胞系与利用该细胞制备疫苗病毒的方法

说明书

本发明公开了一种马丁达比犬肾传代细胞(MDCK)来源的细胞系。该MDCK来源的细胞系来源于保藏的编号为ATCC CCL‑34的MDCK细胞。所述MDCK来源的细胞系可以通过无血清培养和悬浮培养制备。优选地，所述MDCK来源的细胞系具有低致瘤性或无致瘤性。优选所述MDCK来源的细胞系选自MDCK Sky1023、MDCK Sky10234和MDCK Sky3851。进一步公开的是培养所述MDCK来源的细胞的培养方法以及利用所述MDCK来源的细胞制备疫苗病毒的方法。

本申请是申请号为201180042923.8、申请日为2011年09月06日、名称为“适应于无血清培养和悬浮培养的MDCK来源的细胞系与利用该细胞制备疫苗病毒的方法”的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种新的MDCK来源的细胞系(MDCK-derived cell line)，该MDCK来源的细胞系可以通过无血清培养和悬浮培养且不需要依附于载体(carriers)而制得，制备所述MDCK来源的细胞系的方法，以及利用所述MDCK来源的细胞系制备疫苗病毒的方法。

背景技术

通常利用受精卵、鼠脑、原代细胞以及已建立的细胞系作为疫苗制备的来源。然而，这种传统的疫苗来源存在许多问题。例如，当试图将已受精的鸡卵用于疫苗制备时，在饲养鸡、管理依赖于疫苗生产计划的受精卵以及提纯来源于卵蛋白的成分方面存在阻碍。

通常加入胎牛血清作为生长因子用于细胞培养。然而，血清容易受到朊病毒和病毒污染的影响并且血清的商品化产品可能存在质量的差异。而且，来自于澳大利亚和新西兰牛犊(calves)的高质量的胎牛血清产品的定价高，致使生产成本增加。

MDCK细胞系为已建立的细胞系，可以利用其增殖多种病毒。由于MDCK细胞系表现出较强的附着于其他表面的倾向，因此大规模培养依赖于大面积的培养器皿和载体，从而产生大量的费用。特别地，用于培养仪器或载体的投资费用是巨大的并且需要处理步骤来移除附着于载体上的细胞，从而构成了细胞损失和细胞损伤的风险。因此，需要一种可以通过无血清培养和悬浮培养制备并且进而以经济和安全的方式适用于通过动物细胞培养物制备疫苗的细胞系。

美国专利No.6,825,036公开了一种可以在没有固体载体的无血清培养和悬浮培养中生长的MDCK来源的细胞系。该美国专利采用了两个方式使得细胞系适应于悬浮培养。根据第一个方式，通过直接在旋转瓶(spinner flask)中悬浮培养来获得MDCK来源的细胞。在这个情况下，细胞密度没有达到1.0×10⁶个细胞/毫升(工业规模制备所需的水平)。根据第二种方式，在作为载体的珠子的存在下培养原始MDCK细胞而获得MDCK来源的细胞系，扩大了培养规模并且在没有载体的存在下使培养的细胞生长。第二种方式存在培养过程相对复杂的缺陷。

有许多报道称原始MDCK细胞系是致瘤的(tumorigenic)。因此，将原始MDCK细胞系用于疫苗制备时，存在潜在的致瘤性的危险。在这些情况下，需要开发一种新的能够通过无血清培养和悬浮培养制备并且优选具有极低致瘤性或无致瘤性的细胞系。

发明内容

技术问题

设计本发明用于解决现有技术的问题，因此本发明的目的是提供一种可以方便地通过无血清培养和悬浮培养制备、与可以用于培养疫苗病毒的原始MDCK细胞系相比具有极低致瘤性或无致瘤性的MDCK来源的细胞系。本发明的另一个目的是提供一种利用所述细胞系制备病毒特别是流感病毒的方法。

问题的解决方案

相关申请的交叉引用

根据35USC 119(a)，本申请要求2010年9月6日提交的PCT专利申请No.PCT/KR2010/006041以及2011年8月26日在韩国提交的韩国专利申请No.10-2011-0085902的优先权，其全部内容通过引用的方式并入本文中。