[发明专利]一种参芎葡萄糖注射液的化学成分鉴定及活性成分筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于中药制剂质量控制的技术领域，特别涉及一种参芎葡萄糖注射液的化学成分鉴定及活性成分筛选方法。

背景技术

“参芎葡萄糖注射液”由丹参和盐酸川芎嗪采用现代制剂技术制备而成的复方制剂，临床上主要广泛应用于心血管疾病的治疗。现代研究表明，丹参中的多种化学成分以及盐酸川芎嗪均具有心脏保护作用的生物活性，但丹参及盐酸川芎嗪配伍所制成的复方制剂“参芎葡萄糖注射液”，其化学成分与药效之间的关系目前尚无文献报道。由于“参芎葡萄糖注射液”药效物质基础尚不明确，参芎葡萄糖注射液现行质量标准的含量测定项目只对丹参素和盐酸川芎嗪进行定量控制，难以全面反映制剂的化学成分特征。因此，建立一种能快速、有效地确定参芎葡萄糖中各成分的化学结构及其主要活性成分的方法，实现对其物质群的全面控制，为参芎葡萄糖注射液的质量评价提供科学试验依据，具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种参芎葡萄糖注射液的化学成分鉴定及活性成分筛选方法。

本发明针对“参芎葡萄糖注射液”药效物质基础尚不明确，现行质量标准的含量测定成分单一的问题，首次对参芎葡萄糖注射液的化学成分进行系统、整体研究，建立的方法可以快速、有效地确定参芎葡萄糖注射液中各成分的化学结构及其主要活性成分，可为参芎葡萄糖注射液的质量评价提供科学依据，提升制剂的质量控制水平。

本发明所述的参芎葡萄糖注射液的化学成分鉴定及活性成分筛选方法，由以下步骤组成：

步骤一、拟定化学成分鉴定分析条件步骤

运用超高效液相色谱-二极管阵列检测器-串联四级杆飞行时间质谱方法，运用超高效液相色谱-二极管阵列检测器-串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-DAD-Q/TOF)技术，拟定的分析条件；

步骤二、获取参芎葡萄糖注射液中各个色谱峰/成分步骤

根据步骤一中所拟定的化学成分鉴定分析条件，分别吸取对照品溶液和参芎葡萄糖注射液供试品溶液进样测定，获取参芎葡萄糖注射液中各个色谱峰/成分的保留时间tR、紫外光谱图UV、分子式、各个成分的质量的一级质谱图和某成分的特征碎片离子的二级质谱图；

步骤三、化学成分结构鉴定步骤

针对步骤二所获取的参芎葡萄糖注射液中各个色谱峰/成分的保留时间tR、紫外光谱图UV、分子式、各个成分的质量的一级质谱图和某成分的特征碎片离子的二级质谱图来鉴定步骤二的参芎葡萄糖注射液供试品溶液中所含有的化学成分的特征；其中一方面，通过步骤二的对照品溶液比对试验，分析步骤二的参芎葡萄糖注射液供试品溶液中已知化合物的结构；另一方面，通过未知化合物的分子式、紫外最大吸收波长、分子离子及碎片离子信息、质谱裂解特征，鉴定步骤二的参芎葡萄糖注射液供试品溶液的未知化合物结构；

步骤四、心肌细胞萃取实验步骤

利用固相萃取小柱富集纯化，制备参芎葡萄糖注射液样品，选择与参芎葡萄糖注射液样品临床适应症心血管疾病相关的H9c2心肌细胞作为载体进行心肌细胞萃取，制备细胞萃取阴性对照溶液、参芎葡萄糖注射液细胞萃取样品溶液和细胞萃取空白对照溶液；

步骤五、活性成分筛选步骤

运用超高效液相色谱-电喷雾-三重四级杆串联质谱(UPLC-ESI-MS/MS)技术，拟定的分析条件，分别对步骤四的参芎葡萄糖注射液样品、细胞萃取空白对照溶液、细胞萃取阴性对照溶液、参芎葡萄糖注射液细胞萃取样品溶液进样分析；应用多反应监测(MRM)的离子通道即MRM方式，通过对母离子和子离子特异性的跟踪监测，筛选出参芎葡萄糖注射液中能与心肌细胞有相互作用的成分，即为参芎葡萄糖注射液中具有心血管作用的潜在活性成分。

在本发明的一个优选实施例中，所述步骤二中，所述拟定的分析条件具体如下：

1)拟定UPLC液相条件：色谱柱：Agilent Plus Plus C₁₈(2.1mm×100mm,1.8μm)柱；柱温：20℃；流速：0.30mL·min^-1；流动相：0.1％甲酸乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)；梯度洗脱条件：0～18min，5％～62％(A)；18～19min，62％～100％(A)；进样体积：1μL；