[发明专利]一种启动子及其应用有效
| 申请号： | 201510203088.1 | 申请日： | 2015-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN104789566B | 公开（公告）日： | 2017-09-29 |
| 发明（设计）人： | 周哲敏;刘中美;崔文璟;周丽;葛春蕾 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/75;C12N1/21;C12N9/54;C12N9/48;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 启动子 及其 应用 | ||
1.一种启动子，其特征在于，所述启动子是以下任意一种：(1)在PHpaII启动子的-10区后插入了如SEQ ID NO.2所示序列，(2)在P43启动子的-10区后插入了如SEQ ID NO.3所示序列，(3)在P43启动子的-10区后插入了如SEQ ID NO.4所示序列。
2.根据权利要求1所述的启动子，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列是SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示的序列。
3.含有权利要求1所述启动子的质粒载体。
4.含有权利要求3所述质粒载体的基因工程菌。
5.一种权利要求4所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述方法是：首先将外源基因克隆到pMA0911质粒上，然后用权利要求1的启动子代替pMA0911质粒上原有的启动子，得到含有新启动子的质粒pMA0911新启动子-外源基因，然后将质粒pMA0911新启动子-外源基因转化到枯草芽孢杆菌，筛选即得到基因工程菌。
6.一种提高外源蛋白表达的方法，其特征在于，所述方法是：首先将外源基因克隆到pMA0911质粒上，然后用权利要求1的启动子代替pMA0911质粒上原有的启动子，得到含有新启动子的重组表达质粒，然后将该重组表达质粒转化到枯草芽孢杆菌中进行表达。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述外源蛋白为纳豆激酶或氨肽酶。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述表达使用的培养基含有11-13g/L胰蛋白胨、23-25g/L酵母提取物、0.3-0.5％甘油、17mM KH2PO4、72mM K2HPO4，并添加了0.2-0.4g/L氯化钙。
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