[发明专利]一种草金鱼腹鳍细胞系的构建方法有效
| 申请号： | 201510206830.4 | 申请日： | 2015-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN104762252B | 公开（公告）日： | 2017-06-16 |
| 发明（设计）人： | 王浩;吕利群;许丹;喻文娟;喻飞;孔善云;黄美秀 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12Q1/70;C12Q1/02;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙)31262 | 代理人： | 金重庆 |
| 地址： | 201306 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种草 金鱼 腹鳍 细胞系 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种草金鱼腹鳍细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)组织块的处理：剪取草金鱼腹鳍组织，于浓度为1000IU/ml青霉素-链霉素双抗溶液中浸泡30分钟，以75％酒精消毒处理，用浓度为2.5ug/ml的两性霉素B的D-PBS冲洗3次，无菌条件下将腹鳍组织剪成1mm3的组织块，将组织块浸泡在在0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA中消化10min后，再用0.5％透明质酸酶消化1h；
2)原代培养：将组织块移植到底面积为25cm2的培养瓶中，保持温度为26℃，于组织块移植后的第15小时加入2ml增殖培养液，第24小时加入3ml增殖培养液，每天半量更换培养液一次；
3)传代培养：原代培养细胞长成单层后，加入胰蛋白酶静置消化，然后用增殖培养液悬起细胞，以1:2进行传代，于26℃进行传代培养；
所述增殖培养液为含有18v/v％胎牛血清、15ng/ml人碱性成纤维生长因子、2ng/ml表皮生长因子、1ng/ml I型胰岛素样生长因子、200IU/ml青霉素、200ug/ml链霉素、0.5ug/ml两性霉素B、10mM 2-巯基乙醇的M199培养液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中加入的胰蛋白酶浓度为0.25％，消化时间为2min。
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