[发明专利]小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法

权利要求书

1.小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法，包括以下步骤：

⑴蛋白提取：将小鼠脑组织放入盛有液氮的研钵中进行研磨，直至脑组织被研磨成粉末状；然后称取0.2~0.5g脑组织粉末转至1.5mlEP离心管中，按照300µl：0.1g的比例向所述EP离心管中加入4℃预冷的pH=8.1、50mM的Tris缓冲液；其次将所述EP离心管放在冰盒中进行超声处理，之后置于摇床上孵育1~2h，期间涡旋3~5次，最后经离心得上清液A，该上清液A即为蛋白提取液Ⅰ；

⑵热处理增加蛋白溶解性：将所述蛋白提取液Ⅰ按照1：1的体积比与SDS浓度为10%的热处理液混合后，在100℃处理5min，最后经离心得上清液B，该上清液B即为蛋白提取液Ⅱ；

⑶沉淀去脂：将所述蛋白提取液Ⅱ加入到其14倍体积的4℃预冷的去脂沉淀液CUS中，4℃沉淀90min，期间涡旋3~5次；然后离心得沉淀物，该沉淀物用4℃预冷的丙酮洗两次；室温下经15min~30min吹干去除丙酮，即得纯化蛋白粉末；所述去脂沉淀液CUS是由磷酸三丁酯：丙酮：甲醇按照体积比为1：12：1配制而成；

⑷蛋白重溶：将所述纯化蛋白粉末按照1：3的质量体积比加入到尿素蛋白裂解液中，置35℃温箱摇晃1h，经离心得上清液C，该上清液C经蛋白定量后即为蛋白质组样品；所述步骤⑷中尿素蛋白裂解液是指10ml溶液中含有4.2g的尿素、1.52g的硫脲、0.4g的3-[3-(胆酰氨丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐；并按照0.098g/ml现加二硫苏糖醇，按照5µl/ml分别现加Bio-Lyte pH4-6和Bio-Lyte pH6-8，按照40µl/ml现加蛋白酶抑制剂。

2.如权利要求1所述的小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法，其特征在于：所述步骤⑴中Tris缓冲液是指100ml缓冲液中含有0.1g的十二烷基硫酸钠、0.877g的NaCl、1mL的Triton X-100，并按照40µl/ml现加蛋白酶抑制剂。

3.如权利要求1所述的小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法，其特征在于：所述步骤⑴中超声处理条件是指功率130W，时间总计140s，其中每超声4s，间歇10s，循环10次。

4.如权利要求1所述的小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法，其特征在于：所述步骤⑴、所述步骤⑵和所述步骤⑷中离心条件均是指温度为4℃，离心力为12000g，时间为15min。

5.如权利要求1所述的小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法，其特征在于：所述步骤⑵中SDS浓度为10%的的热处理液是指100ml pH=8.1、50mM的Tris缓冲液溶液中含有10g十二烷基硫酸钠，并按照0.03g/ml现加二硫苏糖醇。

6.如权利要求1所述的小鼠脑组织蛋白质组分析的样品制备方法，其特征在于：所述步骤⑶中离心条件是指温度为4℃，离心力为8000g，时间为30min。