[发明专利]一种海藻糖合酶突变体及其制备与应用

权利要求书

1.一种海藻糖合酶突变体，其特征在于，相对于海藻糖合酶亲本，所述突变体是将第220位的异亮氨酸突变成缬氨酸；或将第220位的异亮氨酸突变成缬氨酸的同时将第228位的缬氨酸突变成异亮氨酸，或将第220位的异亮氨酸突变成缬氨酸的同时将第290位的半胱氨酸突变成缬氨酸，或将第220位的异亮氨酸突变成缬氨酸的同时将第294位的苯丙氨酸突变成络氨酸，或将第220位的异亮氨酸突变成缬氨酸的同时将第332位的异亮氨酸突变成苯丙氨酸，或将第220位的异亮氨酸突变成缬氨酸的同时将第271位的谷氨酰胺突变成甲硫氨酸；海藻糖合酶亲本的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.制备权利要求1所述突变体的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)在亲本海藻糖合酶氨基酸序列的基础上确定突变位点；设计定点突变的突变引物，以携带海藻糖合酶基因的载体为模板进行定点突变并构建含突变体的质粒载体；(2)将携带编码突变体基因的质粒转化进宿主细胞；(3)挑选阳性克隆进行发酵培养，并纯化海藻糖合酶突变体。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述质粒载体为pUC系列、pET系列，或pGEX中的任意一种；宿主是细菌或真菌。

4.权利要求1所述突变体在制备海藻糖中的应用。

5.编码权利要求1所述突变体的基因。

6.携带权利要求5所述基因的细胞。

7.权利要求6所述细胞在制备海藻糖中的应用。