[发明专利]一种金纳米粒子探针的制备及其在快速免疫检测中的应用

权利要求书

1.一种用于快速免疫检测的金纳米粒子探针的制备，其特征在于，具体步骤如下：

1)向柠檬酸根保护的胶体金(AuNPs)中加入PEG-NHS，室温下反应，PEG-NHS会通过Au-S键固定到金的表面从而形成PEG保护的金纳米粒子(PEG-AuNPs)；得到的PEG-AuNPs离心，将沉淀物重新分散到磷酸盐缓冲液(PBS)中，如此重复两次；

2)将抗体(Ab)与PEG-AuNPs在低温下孵化过夜，Ab会通过与金上的PEG反应从而与金相连接，得到Ab-AuNPs；接下来，向反应混合物中加入磷酸盐缓冲液；将金上没有与抗体反应的PEG失活；上述体系在室温下反应离心，将沉淀物分散在去离子水中，制备得到用于快速免疫分析的金纳米离子探针。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述PEG-NHS具有如下结构

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)所述的抗体是能够特异性识别待检测抗原的抗体。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于步骤1)所述胶体金与PEG-NHS的摩尔比值为1:1-50000；

所述室温下反应时间为0.5-10h；

所述离心的转速为10000-14000r/min，离心时间为10-30min；

所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M，pH为7.2-7.4。

5.根据权利1-3任一项所述的方法，其特征在于步骤2)所述抗体与PEG-AuNPs孵化温度为2-10℃；

所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M，pH为8.5，室温下反应时间为0.25-5h；

所述离心的转速为10000-14000r/min，离心时间为10-30min。

6.一种用于快速检测蛋白的方法，其特征在于采用权利要求1所述方法制备的金纳米离子探针，包括如下步骤：

将权利要求1制备的金纳米粒子探针(Ab-AuNPs)与已知浓度的抗原进行孵化；将金的生长液加入到上述孵化液中；然后，用微孔板读数器读取它们在525nm处相应的吸光度值，将抗原的浓度值与它们的–ΔA₅₂₅做线性拟合，ΔA₅₂₅＝A–A₀，其中A是向Ab-AuNPs溶液中加入待检测抗原和金的生长液后在525nm处的吸收，A₀是只加入金的生长液后在525nm处的吸收，根据所得直线方程得到未知浓度的待检测抗原。

7.根据权利要求6所述的快速检测蛋白的方法，其特征在于Ab-AuNPs与已知浓度抗原的摩尔比值为1:0-400；

加入待检测蛋白后的孵化温度为37℃，孵化时间为0.5-2h；

金的生长液是终浓度分别为20mM的盐酸羟胺和120μM的氯金酸溶液的混合液。

8.权利要求1所述方法制备的金纳米离子探针在检测生物大分子中的应用。