[发明专利]一种乳牙牙髓干细胞的培养方法

权利要求书

1.一种乳牙牙髓干细胞的培养方法，取牙髓组织，剪碎后加入I型胶原酶，37℃，200rpm消化10-20min，无血清培养基终止消化，吹打离散细胞团块获得单个离散的细胞，加入细胞悬液重悬细胞并调整细胞密度，于37℃、湿度为95％的二氧化碳培养箱中培养，当细胞生长至80％-90％融合时，用含胰蛋白酶的消化液消化细胞后传代培养；其中所述细胞悬液由无血清培养基、表皮生长因子、碱性成纤维生长因子组成。

2.根据权利要求1所述的培养方法，还包括对单个离散细胞进行清洗的步骤。

3.根据权利要求2所述的培养方法，所述清洗具体为离心后用PBS清洗沉淀，离心收集沉淀。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的培养方法，所述单个离散的细胞的直径≤70μm。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的培养方法，所述I型胶原酶的加入量为牙髓组织体积的10-20倍体积。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的培养方法，所述细胞密度为2×10^3/cm²-5×10³/cm²。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的培养方法，所述细胞悬液中所述表皮生长因子的终浓度为10ng/mL。

8.根据权利要求1-7任意一项所述的培养方法，所述细胞悬液中所述碱性成纤维生长因子的终浓度为10ng/mL。

9.根据权利要求1-8任意一项所述的培养方法，所述培养过程中每隔三天换一次细胞悬液。

10.根据权利要求1-9任意一项所述的培养方法，所述胰蛋白酶的浓度为0.125％。