[发明专利]一种同时筛选超氧阴离子清除剂和黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物筛选领域，具体涉及一种快速同时筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂和超氧阴离子清除剂的新方法。

技术背景

黄嘌呤氧化酶是人体内一种非常重要的酶，由于其重要的生物功能最近几十年被广泛研究。黄嘌呤氧化酶在嘌呤代谢过程中发挥着极其重要的作用，它可以催化次黄嘌呤氧化生成黄嘌呤，并进一步催化黄嘌呤氧化生成尿酸，并且在这一过程中伴随有超氧阴离子的生成。过量产生的尿酸会沉积在关节处形成炎症反应，造成痛风。而超氧阴离子不仅具有重要的生物功能，还与多种疾病如炎症、癌症、糖尿病、老年痴呆、动脉粥样硬化以及衰老等有密切联系(参见：Harris M D,Siegel L B,Alloway J A.Gout and hyperuricemia[J].American Family Physician,1999,59(4):925-934；R.Stocker,J.F.Keaney Jr.New insights on oxidative stress in the artery wall[J].Journal of Thrombosisand Haemostasis,2005,3(8):1825-1834；B Halliwell,DSc(Prof).Free radicals,antioxidants,and human disease:curiosity,cause,orconsequence[J].The Lancet,1994,344(8924):721-724.等)。黄嘌呤氧化酶抑制剂可以阻断尿酸的合成，减少体内氧自由基的产生，因而黄嘌呤氧化酶抑制剂可以用来治疗高尿酸血症、痛风以及与活性氧自由基相关的许多疾病(参见：Bryan T.Emmerson.The Management of Gout[J].The New England Journal of Medicine,1996,334(7):445-451；Cristine E.Berry,Joshua M.Hare.Xanthine oxidoreductase and cardiovascular disease:molecularmechanisms and pathophysiological implications[J].The Journal of Physiology,2004,555(3):589-606.等)。目前，已经有上市的黄嘌呤氧化酶抑制剂在临床上应用于治疗痛风等疾病，如别嘌呤醇和非布索坦。长期的临床应用表明，别嘌呤醇和非布索坦具有良好的治疗效果，但是它们都存在较严重的不良反应。目前亟需寻找毒副作用更小、耐受性更好的黄嘌呤氧化酶抑制剂。

由于黄嘌呤氧化酶会导致组织内超氧阴离子的升高，因此黄嘌呤氧化酶抑制剂也会一定程度上具有超氧阴离子清除活性。然而在具有超氧阴离子清除活性的药物筛选中，需要分辨该活性是否是由于药物本身具有黄嘌呤氧化酶抑制活性所引起的，以防止候选药物的黄嘌呤氧化酶抑制活性干扰超氧阴离子清除活性药物筛选的结果。在实际的药物筛选中，一般是将候选药物分别采用独立的黄嘌呤氧化酶抑制剂和超氧阴离子清除剂的筛选方法，最后再将两个检测结果进行综合比对，但是这样的方法对样品的需求量大，并且实验工作量大，而且由于是两次独立的实验，实验结果数据之间的平行性和重现性较差。CN103364519A中公开了一种黄嘌呤氧化酶抑制剂和/或超氧阴离子清除剂的筛选方法，是采用黄嘌呤氧化酶-薄层色谱生物自显影技术和生物活性测定相结合的药物筛选方法，但是该方法无法对药物的活性进行定量，并且所述方法中还存在大量的其他干扰物质，极易产生假阳性和假阴性结果。因此，在实际使用中还需要许多后续的实验来重复验证实验结果的可靠性；使得该方法仍不能独立地同时得到可靠的药物筛选结果。因此，建立一种快速、灵敏、准确地能同时从中药等天然产物中寻找新的高效、低毒的黄嘌呤氧化酶抑制剂和超氧阴离子清除剂的筛选方法，具有极其广阔的前景。