[发明专利]一种基于脱碱基位点的免标记凝血酶检测方法有效
| 申请号： | 201510212497.8 | 申请日： | 2015-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN104807994A | 公开（公告）日： | 2015-07-29 |
| 发明（设计）人： | 韩冰雁;姜立宝;许杰;侯绪芬;相荣超 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | G01N33/573 | 分类号： | G01N33/573;G01N33/68 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 贾汉生;李馨 |
| 地址： | 116024 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 碱基 标记 凝血酶 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于脱碱基位点的免标记凝血酶检测方法，其特征在于，以SEQ ID No:1～2所示序列合成双链DNA，将脱碱基位点和凝血酶适配体同时引入到DNA双链中。
2.根据权利要求1所述的检测方法，包括如下步骤：
(1)具有SEQ ID No:1～2的单链DNA于缓冲溶液中进行退火处理形成双链DNA；
(2)在步骤(1)得到的双链DNA中加入有机配体，混合，5℃下温育5～20min，形成有机配体/DNA复合物；
(3)在步骤(2)的有机配体/DNA复合物中加入含有凝血酶的待测样品，混合，在5℃下温育10～30min，在352nm的激发波长下进行荧光检测。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，在步骤(1)中所述的退火处理：由室温缓慢升温至75℃，保持10min，再缓慢冷却至室温。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述的有机配体为2-氨基-6,7-二甲基-4-羟基蝶啶、2-氨基-4-羟基蝶啶中的一种。
5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述的双链DNA与有机配体的摩尔比为3:1～5:1。
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