[发明专利]一种垂体后叶激素的纯化方法

说明书

本发明公开了一种垂体后叶激素的纯化方法。该方法包括下述步骤：(1)将垂体后叶激素原液与缓冲液混合，所述的缓冲液的pH值为3.0～5.0；(2)采用超滤膜进行超滤，收集截留液；(3)将截留液用水稀释，加入酸调节溶液pH值至1.0～2.0；(4)采用超滤膜进行反超滤，收集超出液，即可。本发明的纯化方法能够有效去除垂体后叶激素中高分子有关物质，该纯化方法生产周期短，制得的产品纯度高，生产成本低，易于放大生产。

技术领域

本发明涉及蛋白质纯化领域，具体涉及一种垂体后叶激素的纯化方法。

背景技术

垂体后叶激素，是由脑垂体后叶中提取的一种混合类多肽激素，主要包含加压素和缩宫素两种主要成分。加压素由九个氨基酸组成，因含有两个半胱氨酸，所以又称八肽。加压素具有抗利尿和升高血压两种作用，因此也称为抗利尿激素。缩宫素也由九个氨基酸组成，因其对平滑肌有刺激作用，能使子宫平滑肌收缩，具有催产作用，故又称催产素。

现有技术在生物大分子活性物质分离纯化过程中，为了去除分子量较大的有关物质，目前主要采用透析、凝胶层析或超滤技术。在垂体后叶激素粗提液中一部分有关物质会与垂体后叶激素凝聚，另一部分有关物质又保持与垂体后叶激素分离，同时垂体后叶激素自身也会形成多聚体。若采用透析技术纯化垂体后叶激素会使原液稀释，同时收率较低，生产周期长；采用凝胶层析技术则载量小，生产成本高，操作技术要求高，对与有关物质结合的垂体后叶激素不能彻底分离，影响收率。采用超滤时，大部分垂体后叶激素并不能透过超滤膜，而是与有关物质一起存在于截留液，不能有效除去有关物质。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于为了克服现有技术中垂体后叶激素纯化收率低、与有关物质不能彻底分离的缺陷，提供一种垂体后叶激素的纯化方法。本发明的纯化方法能够有效去除垂体后叶激素中高分子有关物质，该纯化方法生产周期短，制得的产品纯度高，生产成本低，易于放大生产。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本发明提供了一种垂体后叶激素的纯化方法，其包括下述步骤：

(1)将垂体后叶激素原液与缓冲液混合，所述的缓冲液的pH值为3.0～5.0；

(2)采用超滤膜进行超滤，收集截留液；

(3)将截留液用水稀释，加入酸调节溶液pH值至1.0～2.0；

(4)采用超滤膜进行反超滤，收集超出液，即可。

其中，所述的垂体后叶激素原液可为本领域常规使用的各种垂体后叶激素原液，较佳地通过下述步骤制得：脑垂体丙酮浸泡→剥取后叶丙酮浸泡→干燥→粉碎→丙酮处理→干燥→粉碎→酸提取→活性炭脱色→过滤→得垂体后叶激素原液，本发明优选购于上海第一生化药业有限公司的垂体后叶激素原液。

其中，步骤(1)中所述的缓冲液较佳地为醋酸钠-醋酸缓冲液或醋酸铵-醋酸缓冲液。

其中，所述的垂体后叶激素原液与缓冲液的体积比较佳地为(0.5～5)：1。步骤(1)中，所述的缓冲液的浓度较佳地为10mmol/L～100mmol/L。

其中，步骤(2)中，所述的超滤膜较佳地为截留相对分子量为2kDa的超滤膜，优选来源于德国赛多利斯公司的Hydrosart超滤膜。

其中，步骤(3)中，所述的酸较佳地为盐酸、硫酸和磷酸中的一种或多种。

步骤(4)中，所述的超滤膜较佳地为截留相对分子量为5kDa的超滤膜，优选来源于德国赛多利斯公司的Hydrosart超滤膜。

其中，步骤(2)中，超滤的时间较佳地以超出液体积达到垂体后叶激素超滤起始体积的70％～90％时为止。

其中，步骤(4)中，反超滤的时间较佳地以超出液体积达到垂体后叶激素反超滤起始体积的70％～90％时为止。