[发明专利]一种利用无色透明EVA热熔胶棒制作真菌分生孢子器临时玻片标本的方法有效
| 申请号： | 201510216634.5 | 申请日： | 2015-05-02 |
| 公开（公告）号： | CN104774907B | 公开（公告）日： | 2017-05-17 |
| 发明（设计）人： | 谷安宇;李小林;徐雨然;邓伟;吕永刚;张锦文;年伟;鲁志良 | 申请（专利权）人： | 云南省农业科学院粮食作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;C12R1/645 |
| 代理公司： | 昆明合众智信知识产权事务所53113 | 代理人： | 康珉 |
| 地址： | 650205 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 无色 透明 eva 热熔胶棒 制作 真菌 分生孢子 临时 标本 方法 | ||
1.一种利用无色透明EVA热熔胶棒制作真菌分生孢子器临时玻片标本的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)取材
在5倍的体视显微镜下，从PDA培养基平板上挑取真菌分生孢子器，放到载玻片上备用；
(2)固定和脱水
在所述真菌分生孢子器上滴加25μL～200μL无水乙醇脱水，待所述真菌分生孢子器表面硬化；
(3)包埋
将无色透明EVA热熔胶棒的一端置于酒精灯上加热至其熔而不滴，室温冷却1s～2s后，用针将步骤(2)所述真菌分生孢子器挑入经过酒精灯上加热至熔而不滴的无色透明EVA热熔胶棒的该端内包埋，将包埋了所述真菌分生孢子器的无色透明EVA热熔胶棒的该端置于水中冷却至该端固化；
(4)切片
在5倍的体视显微镜下，用刀片对包埋好的真菌分生孢子器进行切片，切片厚度为100μm～150μm，切成3-5片，切片长度为4mm～6mm；
(5)染色和/或脱水处理
①染色和脱水处理：每个切片采用苏木精伊红染色法染色后，再加25μL～50μL无水乙醇脱水10min；或②脱水处理：在每个切片上加25μL～50μL无水乙醇脱水10min；
(6)选片和整理
选取步骤(5)①或步骤(5)②所述切片中真菌分生孢子器完整的切片，用刀片将其整理成面积大小为2mm×3mm小片，至于载玻片上备用；
(7)封片
在步骤(6)所述载玻片上的切片上滴加混合液25μL～50μL，再将盖玻片盖在该载玻片的切片上，用滤纸擦净盖玻片周围的混合液，再将载玻片置于酒精灯上烘至载玻片上包埋切片的EVA热熔胶熔化，即制成真菌分生孢子器临时玻片标本，所述混合液有甘油和水按2:1的体积比混合而成。
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