[发明专利]抗人ROR1单克隆抗体及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗人ROR1单克隆抗体及其制备方法与应用，具体涉及一种人源化的抗人ROR1单克隆抗体及其制备方法，以及所述单克隆抗体在癌细胞治疗的示踪和靶向应用。

背景技术

受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1(receptor tyrosine kinase-like orphan receptor，ROR1)蛋白最初是在20世纪90年代发现的，之所以被称为孤儿受体，是因为其功能未知。之后有研究人员发现ROR1能在胚胎发育过程中高水平表达，并在胚胎肌肉和骨骼发育调控中扮演了重要的角色。但是在接下来的胎儿发育过程中，这种蛋白的表达被关闭了，成人正常细胞和组织中通常并不表达ROR1。但是，癌细胞是一个例外。

在2008年，Kipps博士研究组发现Wnt5a配体和ROR1相互作用可以提高白血病细胞的生存能力。ROR1应答产生的抗体可以阻碍机体生存信号，而且可以特异性地将这种白血病细胞作为毁灭靶目标。这项研究还指出ROR1抗原仅仅在白血病细胞中被发现，它可以开发为一种癌症没有被检测到的时候，白血病的鉴别或监控治疗后细胞存在状态的特异性标记。

在2012年，Kipps研究组发表研究报告在胚胎发育过程中表达的蛋白ROR1在许多不同类型的癌症中存在，但在正常产后组织中不表达。在这一基础上，研究人员进行了沉默实验，他们在人类乳腺癌细胞中沉默了ROR1蛋白，结果发现这减缓了癌细胞的生长速度，并在实验室和动物实验中都得到了证实。

目前没有针对ROR1的特异性抗体。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种对人ROR1特异性的单克隆抗体。

本发明的另一目的在于提供分泌表达抗ROR1的单克隆抗体的细胞株。

本发明的另一目的在于提供所述抗ROR1的单克隆抗体的制备方法。

本发明的另一目的在于提供所述抗ROR1的单克隆抗体的应用。

本案发明人经大量实验研究，制得了一种抗人ROR1的单克隆抗体。本发明的单克隆抗体是人源化的，其亲和力已经达到0.1nM的水平。这种高亲和力的单克隆抗体在临床上具有重要的价值。

具体而言，一方面，本发明提供了一种抗ROR1的人源化单克隆抗体，该抗体具有重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区和轻链可变区各自具有3个互补决定区(CDR)，其中：重链可变区的CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:27，重链可变区的CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:28，重链可变区的CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:29，轻链可变区的CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:30，轻链可变区的CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:31，轻链可变区的CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:32。

根据本发明的具体实施方案，本发明的单克隆抗体，所述重链可变区的CDR1～CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23，或者分别为SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29；所述轻链可变区的CDR1～CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26，或者分别为SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32。在本发明的一具体实施方案中，本发明的单克隆抗体，所述重链可变区的CDR1～CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23，所述轻链可变区的CDR1～CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26。在本发明的另一具体实施方案中，本发明的单克隆抗体，所述重链可变区的CDR1～CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29；所述轻链可变区的CDR1～CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32。