[发明专利]人类CYP2D6和SULT1A1基因多态性检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种人类CYP2D6和SULT1A1基因多态性检测的试剂盒，尤其涉及一种快速有效地检测少量样本的CYP2D6和SULT1A1基因多态性的试剂盒。

背景技术

他莫昔芬(Tamoxifen)是一种选择性雌激素受体调节剂，可与雌激素竞争雌激素受体，从而抑制雌激素介导的乳腺癌细胞增殖。1977年在美国获FDA批准上市，经过30年的临床应用，被证实可以有效减少乳腺癌的复发，提高患者的生存率。手术后服用他莫昔芬5年是雌激素受体(ER)阳性乳腺癌患者辅助内分泌治疗的金标准。在体内他莫西芬的代谢有多种药物代谢酶参与，其经CYP3A代谢产生的N-去甲基他莫昔芬(N-desmethyltamoxifen)是主要的代谢产物，约占他莫昔芬初级代谢产物的90％；经CYP2D6(细胞色素P4502D，家族2，亚家族D，多肽6，细胞色素P450家族2D6)代谢产生的4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)占他莫昔芬初级代谢产物的10％。N-去甲基他莫昔芬仅能由CYP2D进一步代谢为4-羟-N-去甲基他莫昔芬(4-hydroxy-N-desmethyltamoxifen，Endoxifen)。Endoxifen和4-羟基他莫昔芬与雌激素受体亲和力都较强，是他莫西芬在体内代谢后的主要活性成分，可以有效抑制雌激素介导的乳腺癌细胞扩增。

CYP2D6属于细胞色素P450超级家族，参与临床上约25％药物的代谢。其编码基因位于22号染色体长链q13.1区带，由9个外显子和8个内含子组成。CYP2D6基因具有高度多态性，目前已报道有超过100种不同的等位基因，其编码的蛋白有酶活性升高、降低、丧失或不变四种情况，等位基因的多态性决定了表型的多态性，按代谢活性可以将表型分为快代谢(Um)、泛代谢(EM)、慢代谢(PM)和中等代谢(IM)四种类型。亚洲最常见的等位基因型是CYP2D6*10，突变率约为50％。单个碱基的突变(100C>T)使得CYP2D6*10编码的酶不稳定，催化药物的活性降低。研究证实CYP2D6基因多态性与他莫西芬治疗患者血液内活性成分浓度密切相关，显著影响患者复发率和生存期。一项大型研究结果显示，293名接受治疗的乳腺癌患者中，携带CYP2D6*10等位基因的T/T型患者与C/T型或C/C型患者相比，血中4-羟-他莫西芬较低，且临床结果较差。美国FDA已于2006年建议患者在接受他莫昔芬治疗前首先对CYP2D6的基因型进行检测。

SULT1A1(磺基转移酶家族，细胞质的，苯酚偏好的，成员1，人磺基转移酶1A1)催化酚类和雌激素类化合物磺基化，介导他莫西芬进一步转化成无活性产物排出体外。等位基因SULT1A1*2(638G>A)导致酶活性降低。白种人SULT1A1*1和SULT1A1*2等位基因频率分别为65.5％和33.2％，中国人为91.4％和8％，非裔美洲人为47.7％和29.4％。Nowell等发现用他莫昔芬进行治疗的SULT1A1*2突变纯合子乳腺癌患者的死亡率是非突变纯合子患者的3倍。携带高活性SULT1A1基因女性5年生存率是88％，而携带低活性基因女性只有64％，即使排除了年龄、种族、诊断时病情阶段等影响因素，也同样如此。因此SULT1A1的多态性在他莫昔芬的治疗中也起着重要的作用。

表1：CYP2D6和SULT1A1基因多态性

目前针对基因多态性的检测方法很多，如直接测序法，焦磷酸测序法，高分辨率溶解曲线检测法(High Resolution Melting Analysis，HRM)，荧光定量PCR法等。其中最常见方法为测序法，该方法费用较低，但操作耗时长且灵敏度低；高分辨率溶解曲线法对设备要求比较特殊，在临床推广存在一定的困难；传统荧光定量PCR法在临床上应用较为广泛，但该方法检测基因多态性一般采用Genotyping方法进行检测，该方法对样本数量以及多态性分布有一定要求，样本量少时不能对样本基因多态性进行准确检测。因此，需要建立一种快速有效的检测少量样本的CYP2D6和SULT1A1基因多态性的方法。

发明内容

本发明目的在于，克服现有技术中的不足，提供一种CYP2D6和SULT1A1基因多态性的检测试剂盒，以此解决现有基因多态性检测技术中，样本量少时基因多态性检测效果不理想的问题。本试剂盒可用于高通量、低成本快速检测CYP2D6和SULT1A1基因多态性，其灵敏度高，特异性强，可适用于EDTA、柠檬酸盐抗凝新鲜全血或血浆中提取的人类基因组DNA的检测。