[发明专利]一种2型猪圆环病毒等温PCR现场快速检测试剂盒在审
| 申请号： | 201510219751.7 | 申请日： | 2015-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN104894293A | 公开（公告）日： | 2015-09-09 |
| 发明（设计）人： | 敬晓棋;黄光东;张琼;陈生;黄广争;黄广磊 | 申请（专利权）人： | 陕西溯源农业发展有限公司;黄光东 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 四川君士达律师事务所 51216 | 代理人： | 芶忠义 |
| 地址： | 710000 陕西省西安市经济技术*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 圆环 病毒 等温 pcr 现场 快速 检测 试剂盒 | ||
1.一种2型猪圆环病毒等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于：包括引物组合物、10倍等温扩增反应液、DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照和显色剂，所述的引物组合物由外引物和内引物组成，所述的外引物序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，所述的内引物为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。
2.根据权利要求1所述的一种2型猪圆环病毒等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于：所述的外引物与内引物的摩尔数之比为1:6～9。
3.根据权利要求1所述的一种2型猪圆环病毒等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于：所述的10倍等温扩增反应液由200mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、40～100mmol/L硫酸镁、4～10mol/L甜菜碱、5～18mmol/L的dNTPs和质量百分浓度0.1％的Triton X-100组成。
4.根据权利要求3所述的一种2型猪圆环病毒等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于：所述的dNTPs为含有四种dNTP的等量混合物。
5.根据权利要求1所述的一种2型猪圆环病毒等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于：所述的DNA聚合酶为具有链置换作用的Bst DNA聚合酶，活力为8个活性单位/微升。
6.根据权利要求1所述的一种2型猪圆环病毒等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于：所述的阳性对照为含有插入猪2型圆环病毒ORF2共有片断基因一段特异序列的阳性质粒，其制作方法为：采用PCR扩增一段猪2型圆环病毒ORF2共有片断基因特异序列，然后装入PMD18-T载体，转化至DH5α感受态细菌，抽取质粒DNA经序列确定后，采用紫外分光光度计测定质粒DNA的浓度并用灭菌双蒸水调整拷贝数至107拷贝/μL。
7.权利要求1所述的引物组合物，其特征在于：所述的引物组合物由外引物和内引物组成，所述的外引物序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，所述的内引物为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。
8.权利要求7所述的引物组合物在2型猪圆环病毒检测中的应用。
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