[发明专利]犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂，其特征在于，包括：犬细小病毒特异性免疫球蛋白；其中，所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白的含量＞30mg/ml，纯度≥97％，内毒素含量＜16IU，针对犬细小病毒的中和抗体效价达到1：400以上。

2.一种权利要求1所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备高免健康犬血浆或血清；(2)低温乙醇法提取步骤(1)制备的血浆或血清中的犬细小病毒特异性免疫球蛋白；(3)纯化步骤(2)所提取的犬细小病毒特异性免疫球蛋白；(4)将步骤(3)纯化后的犬细小病毒特异性免疫球蛋白进行超滤、浓缩、透析、过滤除菌，分装，即得。

3.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述制备高免健康犬血浆或血清，包括以下步骤：选取健康犬，接种犬细小病毒疫苗，2周后按照同样方法加强免疫；免疫后10-14天，采集抗体效价不低于1：1280的犬血浆或血清。

4.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述低温乙醇法包括：

(a)将血浆或血清融化，降温至0℃，调整pH至7.5-7.8；按照g/100ml计，加入预冷乙醇至终浓度9-12％，离心，收集上清液；

(b)调整上清液的pH至3.5-4.4；按照g/100ml计，加入乙醇至终浓度15-25％，静置过夜，离心，收集沉淀；

(c)向步骤(b)所得沉淀中加入10倍体积的0℃注射用水，用0.5mol/L Na₂HPO₄和0.5mol/L醋酸调整pH至5.1-5.5，搅拌4-6小时，静置过夜，获得溶解液(Ⅰ)；

(d)将步骤(c)所获得的溶解液(Ⅰ)用连续离心机离心，收集上清液，过滤，得滤液；用0.5mol/L Na₂HPO₄和0.5mol/L醋酸调整滤液的pH至4.0-5.5；然后，按照g/100ml计，加入乙醇至终浓度20-25％，搅拌3-5小时，静置过夜，获得溶解液(Ⅱ)；

(e)将步骤(d)获得的溶解液(Ⅱ)离心，得到上清液；将上清液调pH至5.5-6.4，然后按照g/100ml计，加入乙醇至终浓度23-25％，静置过夜，离心，收集沉淀，即得。

5.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述低温乙醇法包括：

(a)将血浆或血清融化，降温至0℃，调整pH至7.5；按照g/100ml计，加入预冷乙醇至终浓度10％，离心，收集上清液；

(b)调整上清液的pH至4.0；按照g/100ml计，加入乙醇至终浓度20％，静置过夜，离心，收集沉淀；

(c)向步骤(b)所得沉淀中加入10倍体积的0℃注射用水，用0.5mol/L Na₂HPO₄和0.5mol/L醋酸调整pH至5.5，搅拌4小时，静置过夜，获得溶解液(Ⅰ)；

(d)将步骤(c)所获得的溶解液(Ⅰ)用连续离心机离心，收集上清液，过滤，得滤液；用0.5mol/L Na₂HPO₄和0.5mol/L醋酸调整滤液的pH至5.0；然后，按照g/100ml计，加入乙醇至终浓度20％，搅拌4小时，静置过夜，获得溶解液(Ⅱ)；

(e)将步骤(d)获得的溶解液(Ⅱ)离心，得到上清液；将上清液调pH至6.0，然后按照g/100ml计，加入乙醇至终浓度25％，静置过夜，离心，收集沉淀，即得。

6.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述纯化采用离子交换层析法；优选为，采用DEAE-Sepharose-FF凝胶柱。

7.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述超滤、浓缩、透析包括以下步骤：

收集纯化后的蛋白液，边搅拌边加入0.5mol/L盐酸液，调整pH至4.0，用6倍体积的2-8℃注射用水透析；按g/ml，透析至乙醇含量低于0.025％，蛋白液浓度3％以上，即得。

8.权利要求1所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂在制备预防或治疗犬细小病毒病的药物或试剂中的用途。