[发明专利]犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫球蛋白制剂，尤其涉及犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂，本发明还涉及所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂的制备方法及其在制备预防或治疗犬细小病毒病的药物或试剂中的用途，属于免疫球蛋白制剂的制备领域。

背景技术

犬细小病毒病是由犬细小病毒(canine parvovirus，CPV)感染犬引起的一种急性传染病，以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少以及心肌炎为主要特征，发病率高，传染性强，死亡率高，是危害犬最为严重的传染病之一。目前，犬细小病毒疾病临床治疗药物主要是抗病毒药物和注射干扰素，但是这些药物效果并不显著。

免疫球蛋白是一类具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白，它普遍存在于动物的血液、组织液及外分泌液中，其中血清和初乳中的含量最高。免疫球蛋白是机体免疫系统的重要组成成分，在抗感染和免疫调节中发挥着重要的作物。经静脉注射吸收后，可迅速提高受者血液中免疫球蛋白的含量，通过其特异性中和作用及免疫调理等功能，起到预防和治疗各种病毒性、细菌性、真菌性、寄生虫性等疾病的作用。

因此，开发一种针对犬细小病毒的高纯度、高浓度、高活性和高效价的特异性免疫球蛋白制剂，是临床治疗和紧急预防犬细小病毒病的有效手段。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂；

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂的制备方法，该方法所制备的犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂具有高纯度、高浓度和高效价的特点；

本发明所要解决的第三个技术问题是提供所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂在制备预防或治疗犬细小病毒病的药物或试剂中的用途。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明首先公开了一种犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂，包括：犬细小病毒特异性免疫球蛋白；其中，所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白的含量＞30mg/ml，纯度≥97％，内毒素含量＜16IU，针对犬细小病毒的中和抗体效价(TCID₅₀/200μl)达到1：400以上。

本发明所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂为pH 4.0左右的液态或冻干剂型；其中，犬细小病毒特异性免疫球蛋白主要以IgG单体存在。本发明犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂保存期长，2-8℃可保存2年以上。

本发明所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂的使用方法，一般采用直接静脉推注或静脉滴注；使用量较少时，可以直接静脉推注；使用量较大时，可采用5％葡萄糖注射液或氯化钠注射液适当稀释后进行静脉滴注；主要用于各品种犬的细小病毒感染疾病的治疗与紧急预防，有效增加患病犬机体免疫力和抗病力。

当犬受到细小病毒感染时，尽快静脉输注本发明犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂，可迅速使病犬血液中的犬细小病毒抗体从无或低浓度上升到有保护水平的浓度，迅速中和和杀灭病犬体内的细小病毒，有效阻止细小病毒对机体的继续感染和侵害，起到迅速治疗犬细小病毒病的作用。同时，免疫球蛋白自身又具有机体免疫调理作用，激活病犬体内的免疫细胞吞噬和清除侵入的病原，迅速增强病犬免疫力和抵抗力。

本发明进一步公开了一种所述犬细小病毒特异性免疫球蛋白制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)制备高免健康犬血浆或血清；(2)低温乙醇法提取步骤(1)制备的血浆或血清中的犬细小病毒特异性免疫球蛋白；(3)纯化步骤(2)所提取的犬细小病毒特异性免疫球蛋白；(4)将步骤(3)纯化后的犬细小病毒特异性免疫球蛋白进行超滤、浓缩、透析、过滤除菌，分装，即得。

其中，步骤(1)所述制备高免健康犬血浆或血清，包括以下步骤：选取健康犬，接种犬细小病毒疫苗，2周后按照同样方法加强免疫；免疫后10-14天，采集抗体效价不低于1：1280的犬血浆或血清。

经中国农业部合法批准的多种犬细小病毒疫苗均适用于本发明，按照使用说明使用即可。

步骤(2)所述低温乙醇法包括：(a)将血浆或血清融化，降温至0℃，调整pH至7.5-7.8；优选为使用pH为4.0的醋酸缓冲液调整pH；按照g/100ml计，加入预冷乙醇，优选为预冷-15℃—-20℃的53.3％乙醇至终浓度9-12％，离心，收集上清液；

(b)调整上清液的pH至3.5-4.4；按照g/100ml计，加入乙醇至终浓度15-25％，静置过夜，离心，收集沉淀；