[发明专利]一种基于化学发光法检测Lp-PLA2和CRP含量的试剂盒及方法和应用

权利要求书

1.一种基于化学发光法的基于化学发光法检测Lp-PLA2和CRP含量的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒、异硫氰酸荧光素标记的Lp-PLA2单克隆抗体、异硫氰酸荧光素标记的CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的Lp-PLA2单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的CRP单克隆抗体和碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液、稀释液、清洗液、Lp-PLA2系列校准品和CRP系列校准品。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒由羧基修饰的磁微粒表面共价结合抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体制备得到，其中，所述的磁微粒粒径为0.7~1μm，内核为四氧化三铁表面包裹有羧基基团。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒悬浮于所述稀释液中，配制成0.5～2μg/mL 的磁微粒溶液；所述异硫氰酸荧光素标记的Lp-PLA2单克隆抗体和异硫氰酸荧光素标记的CRP单克隆抗体溶解在所述稀释液中，分别配制成0.25～0.5μg/mL 异硫氰酸荧光素标记的Lp-PLA2单克隆抗体溶液和0.25～0.5μg/mL异硫氰酸荧光素标记的CRP单克隆抗体溶液；所述的碱性磷酸酶标记的Lp-PLA2单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的CRP单克隆抗体溶解在所述稀释液中，分别配制成0.25~0.5μg/mL 碱性磷酸酶标记的Lp-PLA2单克隆抗体溶液和碱性磷酸酶标记的CRP单克隆抗体溶液。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的异硫氰酸荧光素标记的Lp-PLA2单克隆抗体溶液和异硫氰酸荧光素标记的CRP单克隆抗体溶液通过透析法制备得到。

5.根据权利要求1或3所述的试剂盒，其特征在于，所述的碱性磷酸酶标记的Lp-PLA2单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的CRP单克隆抗体通过分别活化Lp-PLA2单克隆抗体、CRP单克隆抗体以及碱性磷酸酶溶液后，分别将活化后的Lp-PLA2单克隆抗体和CRP单克隆抗体与活化后的碱性磷酸酶溶液混合后得到。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的化学发光底物液为0.1~0.3M、pH值为8~10 的Tris-HCl缓冲液，所述化学发光底物液含有0.2～0.4mg/mL 的二氧杂环乙烷。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的稀释液为0.05～0.5M 、pH 值为7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液且所述稀释液含0.4～0.6 wt% 的牛血清白蛋白BSA和0.05～0.3wt% 的叠氮化钠；所述的清洗液为0.1～0.2M、pH 值为8～9 的Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液含有0.01～0.04wt% 的吐温20 和15～20wt% 的氯化钠。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的Lp-PLA2系列校准品和CRP系列校准品的浓度范围分别为0～50ng/mL和0～100ng/m L。

9.一种利用权利要求1所述的试剂盒来检测Lp-PLA2和CRP含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将试剂盒中的所有试剂取出后平衡到室温；使用前将抗FITC 多克隆抗体包被的磁微粒溶液彻底混匀，确保磁微粒悬浮均匀；用去离子水将清洗液稀释，混匀；设定好37℃水浴；使化学发光检测仪处于待测状态；

（2）待测样本或校准品、FITC 标记的Lp-PLA2单克隆抗体溶液和ALP标记的Lp-PLA2单克隆抗体溶液混合温育，同时将待测样本或校准品、FITC 标记的CRP单克隆抗体溶液分别与和ALP标记的CRP单克隆抗体溶液混合温育，用多管混匀器振荡混匀，置37±0.5℃水浴，然后向各个试管中加入抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒溶液，用多管混匀器振荡混匀，置37±0.5℃水浴，试管连架放至磁分离器上，确保试管与磁板接触，沉淀；倒出上清液，然后加稀释后的清洗液至每一试管中，置多管混匀器振荡混匀；重复上述清洗操作，共清洗3次；

（3）加碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液至每一试管中，混匀，在5分钟内用发光检测仪进行检测，利用四参数逻辑拟合得到校准品剂量-反应曲线的回归方程，再根据待测样本的相对发光强度可以从回归曲线上返算出样本中待测物的浓度。

10.权利要求1所述的试剂盒在制备用于脑卒中发生后神经功能损伤程度和梗死体积评价的试剂上的应用。