[发明专利]一种基于化学发光法检测Lp-PLA2和CRP含量的试剂盒及方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析领域，具体地涉及一种基于化学发光法检测Lp-PLA2和CRP含量的试剂盒及方法和应用。

背景技术

缺血性脑卒中是临床上的一种常见病、多发病，其常见的病因为动脉粥样硬化导致管腔狭窄和脑血栓形成，造成局部脑供血区血流中断，发生脑组织缺血、缺氧、软化坏死。大量研究标明动脉粥样硬化本身是一个炎症的过程，持续的低水平炎症预示着心脑血管疾病发生的可能性。Lp-PLA2为新近发现的炎症标志物，属于磷脂酶A2超家族中的非钙离子依赖型磷酸酯酶，主要由炎症细胞(如巨噬细胞、淋巴细胞等)分泌，并受炎症介质的调节。CRP是由肝脏合成的一种全身性炎症反应急性期的非特异性标志物，是心脑血管疾病最强有力的预测因子之一，对心血管、脑血管以及外周血管疾病有着最好的预测及预后效果。

有研究表明，缺血性脑卒中发生后，患者Lp-PLA2及CRP水平都明显升高，其水平随神经功能缺损程度增加而呈递增趋势，差异有统计学意义。同时血清CRP水平对预测脑梗死体积也具有重要意义。Lp-PLA2及CRP的同时检测有助于更加全面地判断脑梗的严重程度并对其防治与预后提供实验室参考。

目前通过联合检测Lp-PLA2与CRP两个指标实现对缺血性脑卒中的诊断的检测方法主要有胶乳增强免疫比浊法、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。胶乳增强免疫比浊法存在检测线性范围窄、阳性率低等缺点；ELISA法存在灵敏度低、线性范围窄、不易实现全自动化等缺陷；从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。目前化学发光免疫分析技术因其有上述诸多优点得到了广泛的应用。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种基于化学发光法的基于化学发光法检测Lp-PLA2和CRP含量的试剂盒，该检测试剂盒的检测具有简便、快速、灵敏度高、线性范围宽和稳定性好等优点，可以有效地用于脑卒中发生后神经功能损伤程度和梗死体积评价。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于化学发光法的基于化学发光法检测Lp-PLA2和CRP含量的试剂盒，所述的试剂盒包括抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒、异硫氰酸荧光素标记的Lp-PLA2单克隆抗体、异硫氰酸荧光素标记的CRP单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的Lp-PLA2单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的CRP单克隆抗体和碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液、稀释液、清洗液、Lp-PLA2系列校准品和CRP系列校准品。本发明的试剂盒的反应试管的材料选自透明的聚苯乙烯、聚乙烯和聚丙烯中的至少一种。

其中，所述的抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒由羧基修饰的磁微粒表面共价结合抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体制备得到，其中，所述的磁微粒粒径为0.7～1μm，内核为四氧化三铁表面包裹有羧基基团。在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的待测样品基质中快速分离、纯化出目的待测物是临床检验工作者面临的难题之一。磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。

具体地，所述的抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒悬浮于所述稀释液中，配制成0.5～2μg/mL的磁微粒溶液；所述异硫氰酸荧光素标记的Lp-PLA2单克隆抗体和异硫氰酸荧光素标记的CRP单克隆抗体溶解在所述稀释液中，分别配制成0.25～0.5μg/mL异硫氰酸荧光素标记的Lp-PLA2单克隆抗体溶液和0.25～0.5μg/mL异硫氰酸荧光素标记的CRP单克隆抗体溶液；所述的碱性磷酸酶标记的Lp-PLA2单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的CRP单克隆抗体溶解在所述稀释液中，分别配制成0.25～0.5μg/mL碱性磷酸酶标记的Lp-PLA2单克隆抗体溶液和碱性磷酸酶标记的CRP单克隆抗体溶液。

优选地，所述的异硫氰酸荧光素标记的Lp-PLA2单克隆抗体溶液和异硫氰酸荧光素标记的CRP单克隆抗体溶液通过透析法制备得到。

优选地，所述的碱性磷酸酶标记的Lp-PLA2单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的CRP单克隆抗体通过分别活化Lp-PLA2单克隆抗体、CRP单克隆抗体以及碱性磷酸酶溶液后，分别将活化后的Lp-PLA2单克隆抗体和CRP单克隆抗体与活化后的碱性磷酸酶溶液混合后得到。