[发明专利]具有抗氧化活性的小肽、制备方法及其应用

说明书

本发明提供具有抗氧化活性的小肽、制备方法及其应用，属于生物技术领域。该小肽的氨基酸序列为AREGETVVPG。该小肽的制备方法包括：将麦胚清蛋白采用胰蛋白酶酶解，得到清蛋白水解产物Ⅰ；取所述清蛋白水解产物Ⅰ中分子量小于10KDa的组分，采用凝胶过滤色谱分离，取具有抗氧化活性的组分作为清蛋白提取物Ⅱ；将所述清蛋白提取物Ⅱ采用碱性蛋白酶酶解，得到清蛋白水解产物Ⅲ；将所述清蛋白水解产物Ⅲ依次采用凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱分离，得到所述小肽。本发明小肽具有较强抗氧化活性，来源于麦胚清蛋白，具有安全、高效、制备方法简单重复性好的特点，可以应用于提高食品的稳定性、储藏期或制备具有抗氧化活性保健食品。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及具有抗氧化活性的小肽、制备方法及其应用。

背景技术

自由基理论被提出后，许多研究结果都显示自由基与人类多种疾病和衰老的发生有关，如动脉粥样硬化、血栓、心肌缺血再灌注损伤、糖尿病、癌症和神经退行性疾病等。活性氧(ROS)是一种广泛存在于人体中的自由基，由线粒体产生，包括超氧阴离子自由基、羟基自由基等，它们会损伤线粒体DNA、酶和膜脂质，从而引起各种疾病的发生。抗氧化剂具有捕获和中和自由基的能力，当机体中的自由基产生过多而超出清除能力的范围时，通过补充抗氧化剂可以清除多余的自由基，维持体内自由基平衡，可以有效预防多种自由基引起的疾病。人工合成的抗氧化剂如BHA、BHT、PG、TBHQ等，是多种食品的添加剂，它们能延缓或阻止食品中的油脂酸败、蛋白质变性，提高食品的稳定性、延长储藏期。但长期服用会伤害人体的肝、脾、肺，具有蓄积性致癌作用，影响与呼吸相关的酶的活性，人工抗氧化剂的应用因此受到了限制。从动物和植物中寻找具有抗氧化活性的天然物质是解决这一问题的关键，且天然抗氧化剂具有安全、高效、来源广泛的特点。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有较强抗氧化活性的小肽，来源于麦胚清蛋白，具有安全、高效、来源广泛的特点。

本发明的另一目的是提供上述小肽的制备方法，该方法简单，安全，高效，重复性好。

本发明的再一目的是提供上述小肽在提高食品的稳定性、延长食品储藏期或者制备具有抗氧化活性的保健食品方面的应用。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种具有抗氧化活性的小肽，氨基酸序列为AREGETVVPG，如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供所述小肽的制备方法，包括如下步骤：

(1)将麦胚清蛋白采用胰蛋白酶酶解，得到清蛋白水解产物Ⅰ；

(2)取所述清蛋白水解产物Ⅰ中分子量小于10KDa的组分，采用凝胶过滤色谱分离，取具有抗氧化活性的组分作为清蛋白提取物Ⅱ；

(3)将所述清蛋白提取物Ⅱ采用碱性蛋白酶酶解，得到清蛋白水解产物Ⅲ；

(4)将所述清蛋白水解产物Ⅲ依次采用凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱分离，得到所述小肽。

优选的技术方案中，步骤(2)中所述凝胶过滤色谱中的凝胶填料为Sephadex G-75，流动相为水。

优选的技术方案中，步骤(4)中所述凝胶过滤色谱中的凝胶填料为Sephadex G-15，流动相为水，取具有抗氧化活性的洗脱液。

优选的技术方案中，步骤(4)中所述反相高效液相色谱中使用Waters XBridgeTMprep C18色谱柱，洗脱程序为：0～10min，流动相A100～85％线性降低，流动相B0～15％线性升高；10～15min，流动相A85～80％线性降低，流动相B15～20％线性升高；收集对应于流动相B体积浓度为15.8～16％时的洗脱液，即得所述小肽；所述流动相A是浓度为0.05-0.15％三氟乙酸的水溶液，流动相B是浓度为0.05-0.15％三氟乙酸的乙腈溶液。